Molecular Probes™ Intracellular pH Calibration Buffer Kit

Beschreibung

Das intrazelluläre pH-Kalibrierpuffer-Kit ermöglicht die Quantifizierung des intrazellulären pH-Werts, wenn es in Verbindung mit pHrodo™ Red AM, pHrodo™ Green AM oder BCECF intrazellulären pH-Indikatoren verwendet wird; pHrodo™ Red AM und pHrodo™ Green AM fluoreszieren bei neutralem pH schwach, die Fluoreszenz nimmt mit sinkendem pH-Wert jedoch immer mehr zu. Die Modifikation von roten und grünen pHrodo™ Farbstoffen mit AM-Estergruppen führt zu einem ungeladenen Molekül, das Zellmembranen durchdringen kann. Einmal in der Zelle werden die lipophilen Blockierungsgruppen durch unspezifische Esterasen gespalten, was zu einer Verbindung führt, die im intrazellulären Raum verbleibt. Die Fluoreszenzintensität der Sonden ist dann ein Indikator für den intrazellulären pH-Wert. Durch die anschließende Verwendung des Intrazellularen pH-Kalibrierpuffer-Kits kann dieser intrazelluläre pH-Wert quantifiziert werden.

Das Intrazellulare pH-Kalibrierpufferkit enthält eine Reihe von pH-Kalibrierpuffern (pH 4,5, 5,5, 6,5 und 7,5) sowie Valinomycin und Nigericin, die dazu beitragen, den pH-Wert innerhalb und außerhalb der Zellen auszugleichen. Nach der Verwendung von pHrodo™ Red AM oder pHrodo™ Green AM und der Messung der Fluoreszenzintensität unter experimentellen Bedingungen werden die Zellen in einem der Kalibrierpuffer resuspendiert, dem Valinomycin und Nigericin hinzugefügt wurden, und die Fluoreszenzintensität wird erneut gemessen. Dies wird mit den verbleibenden Kalibrierpuffern wiederholt, so dass eine Standardkurve erstellt werden kann, mit der der intrazelluläre pH-Wert, der mit den experimentellen Bedingungen verbunden ist, bestimmt wird.