Thermo Scientific™ ActivX™ Desthiobiotin-FP Serine Hydrolase Probe

Thermo Scientific Serinhydrolase-Sonden sind ActivX™ Fluorophosphonat (FP) und andere getaggte Phosphonatsonden zum Reinigen oder Testen von aktiven Serinhydrolase-aktiven Stellen mithilfe von Fluoreszenz, Biotin-Affinität oder Massenspektrometrie.

Merkmale der ActivX Desthiobiotin-FP Serinhydrolase-Sonde:

• Spezifisch – markiert das reaktive Zentrum aktiver Serinhydrolasen
• Kompatibel – Tags für Erfassung, Nachweis und Staudinger-Konjugation verfügbar
• Flexibel – für die Enzymmarkierung in-vitro oder intrazellulär

Diese ActivX™ FP-Sonden verfügen über eine reaktive Fluorophosphonatgruppe, die spezifisch und kovalent das Serin im aktiven Zentrum von enzymatisch aktiven Serinhydrolasen markiert. Diese Sonden sind mit einem Desthiobiotin-Tag (Biotinanalogon) zur selektiven Anreicherung bzw. einem TAMRA-Fluorophor zum Nachweis einer reaktiven Azidogruppe (Staudinger-Reagenzien) erhältlich, die die Multiplex-Markierung bei Verwendung mit Phosphin- oder Alkin-derivatisierten Tags erleichtert. Diese Sonden eignen sich zur Beurteilung der Aktivität oder zum Screening von niedermolekularen Inhibitoren gegen Enzyme, die aus Zelllysaten, subzellulären Fraktionen, Geweben und rekombinanten Proteinen gewonnen wurden.

Anwendungen:
• Bestimmung der Enzymaktivität von Serinhydrolasen in Zellen und Lysaten
• Mapping der Serine im aktiven Zentrum funktionell unterschiedlicher Serinhydrolase-Familienmitglieder (z. B. Proteasen, Lipasen, Esterasen)
• Screening auf Bindungsaritäten kleiner Moleküle und Hemmung des aktiven Zentrums
• Profiling von Serinhydrolasen mittels Fluoreszenz, Western Blotting oder Massenspektrometrie

ActivX Aktivstellen-Sonden sind besonders vorteilhaft für die Bestimmung der Enzymaktivität im Vergleich zu anderen Methoden des Proteinexpressions-Profilings, die nur die Abundanz messen. Da viele proteolytische Enzyme aus der Familie der Serinhydrolasen als inaktive Proenzyme (Zymogene) exprimiert werden, untersucht ActivX FP nur die selektive Anreicherung jener Enzyme, die zum Zeitpunkt der Markierung funktionell aktiv und biologisch relevant sind. Diese Funktion ermöglicht auch das selektive Screening von Inhibitoren oder anderen Bedingungen, die die Enzymaktivität verändern.

Aktive Serinhydrolasen, die mit ActivX FP-Sonden markiert sind, können mit Western Blotting, Fluoreszenzgel-Bildgebung oder Massenspektrometrie mithilfe eines kompatiblen Tags erkannt und quantifiziert werden. Die TAMRA-FP-Sonde eignet sich für Markierung und Nachweis aktiver Serinhydrolasen in Proben mittels Fluoreszenz-Gelbildgebung, Kapillarelektrophorese oder Massenspektrometrie. Ein Anti-TAMRA-Antikörper ist auch für die Immunanreicherung von TAMRA-FP-Sonden-markierten Proteinen erhältlich. Die Azido-FP-Sonde wird in Kombination mit einem Phosphin- oder Alkin-derivatisierten Tag zum Nachweis oder zur Anreicherung verwendet. Desthiobiotin-FP-Sonden können zur Streptavidin-basierten Anreicherung und zum Nachweis aktiver Serinhydrolase-Proteine beim Western Blotting oder bei der Massenspektrometrie verwendet werden.

Die Serinhydrolase-Superfamilie ist eine der größten, vielfältigsten Enzymfamilien in eukaryotischen Proteomen. Serinhydrolasen werden im Allgemeinen in zwei große Familien eingeteilt: Serinproteasen (z. B. Trypsin, Elastase und Thrombin) und metabolische Serinhydrolasen. Metabolische Serinhydrolasen werden auf der Grundlage von Struktur, katalytischem Mechanismus und Substratpräferenz in mehrere Enzymunterklassen (z. B. Esterasen, Lipasen, Amidasen und Peptidasen) unterteilt.

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