Invitrogen™ Ambion™ RNase-Hemmer, geklont, 40 U/μl

Der Ambion RNase-Inhibitor, ein bei E. coli produziertes rekombinantes humanes Protein, ist ein starker Inhibitor neutraler Bauchspeicheldrüsenenzyme vom Typ RNase A. Der Hemmmodus ist nicht kompetitiv; der Inhibitor bindet RNasen in einem Verhältnis von 1:1 fest. Das Enzym inaktiviert nachweislich die in vielen Geweben und Zelltypen vorhandenen RNasen. Die Zugabe des Ribonuklease-Inhibitors (RI) hat sich als nützlich erwiesen, wenn die Integrität der RNA beibehalten werden muss, z. B. bei der Herstellung von cDNA durch reverse Transkription, In-vitro-RNA-Transkription und In-vitro-Proteinsynthese. RI hemmt RNase I, T1, T2, H, U1, U2 oder CL3 nicht. RI benötigt mindestens 1 mM DTT für die Aufrechterhaltung der Aktivität und hat einen Aktivitätsbereich zwischen pH 5,0 und 8,0 mit Aktivitätsmaximum zwischen pH 7,0 und 8,0. Da die Hemmung durch Bildung eines 1:1-Komplexes mit RNasen erfolgt, muss darauf geachtet werden, dass der Ribonuklease-Inhibitor nicht denaturiert oder oxidiert wird (z. B. durch Zugabe von SDS, Harnstoff usw.). Die Transkription, Translation und cDNA-Synthesereaktionen sollten um RI ergänzt werden, um eine endgültige Konzentration von 1 E/μl zu erreichen. Der RNase-Inhibitor wird rigoros auf kontaminierende RNase-, Endonuklease-, Exonuklease- und Protease-Aktivität untersucht.
Einheitendefinition: Eine Einheit ist die Proteinmenge, die erforderlich ist, um die Aktivität von 5 ng der RNase A um 50 % zu hemmen. Einheiten-Assaybedingungen: 100 mM Tris-Acetat (pH 6,5), 1 mM EDTA, 1 mM zyklischer 2'-, 3'-CMP und RNase-Inhibitoren. Durch Zugabe von RNase A wird die Reaktion ausgelöst. Die Aktivität des RNase-Inhibitors wird durch die Hemmung der Hydrolyse von zyklischer 2'-, 3'-CMP durch RNase A gemessen

Anwendungen:

Genexpressionsanalyse und Genotypisierung, In-vitro-Transkription, PCR und Echtzeit-PCR, Echtzeit-PCR (qPCR), reverse Transkription