Cytiva Amersham™ QuickStain Proteinmarkierungskit

• Schnelle SDS-PAGE-Analyse: Voretikettierte Proteinproben mit gebrauchsfertigen Cy5 Farbstoff für den schnellen, empfindlichen Nachweis ohne Gelfärbung und Entfärbung
• Einfache Normalisierung von Western Blots: Verwenden Sie das Standardprotokoll von 30 Minuten für quantitative Western-Blot-Ergebnisse; dadurch entfällt die Notwendigkeit von Ladekontrollen.
• Breites Probenspektrum: Effektive Markierung komplexer Proben oder reiner Proteine aus 1 μg/ml bis 20 mg/ml, daher ist keine Vorabmessung der Proteinkonzentrationen erforderlich.
• Gute Empfindlichkeit: So empfindlich wie Silberfärbung mit breiterem Dynamikbereich
• Großer dynamischer Bereich: Gleichzeitige Detektion des Hauptbandes und von Verunreinigungen bis zu einer Intensität von 0,1 % des Hauptbandes mittels eines Fluoreszenzscanners oder -bildgebers.
• Vielseitigkeit: Proben können auf selbstgegossene Gele oder verschiedene kommerzielle Gele aufgetragen werden; dies ist möglich, da die meisten Materialien eine geringe Viskosität aufweisen. Cy5 Fluoreszenz

Wählen Sie zwischen zwei Schnellmarkierungsprotokollen

Amersham QuickStain basiert auf Cy5 NHS-Ester-Markierung reaktiver Aminogruppen in Proteinen. Zuerst werden die Proteinproben 10-fach im optimierten Markierungspuffer verdünnt. Fügen Sie dann einen festen Betrag hinzu. Cy5 Die Für qualitative Analysen 5 Minuten °bei 95 °C inkubieren, für quantitative Anwendungen 30 Minuten bei Raumtemperatur.

Proteine können direkt nach der Elektrophorese oder dem Blotting nachgewiesen werden.

Für die SDS-PAGE-Analyse ist kein Färben und Entfärben des Gels erforderlich. Sie können auch vermeiden, dass Ponceau S Ihre Blots für die Western Blotting-Analyse färbt. Für beide Anwendungen können Proteine einfach mit einem Fluoreszenzscanner wie z. B. nachgewiesen werden. Amersham Typhoon-Scanner oder ein CCD-Bildsensor wie z. B. Amersham Imager 600RGB.

Vergleich mit Coomassie und Silberfärbung

Amersham QuickStain bietet im Vergleich zu deutlich besseren Signal-Rausch-Verhältnissen und Signal-Hintergrund-Verhältnissen. Coomassie Färbung. Es eignet sich gut für die Reinheitsanalyse während der Proteinaufreinigung, da es die Empfindlichkeit der Silberfärbung aufweist, aber einen größeren Dynamikbereich hat, um sowohl schwache als auch starke Signale zu quantifizieren.

Gesamtproteinbestimmung zur Normalisierung von Western Blots

Mit Amersham Mit QuickStain können Sie auf die Verwendung von Ladekontrollen verzichten. Verwenden Cy5 zur Bestimmung des Gesamtproteingehalts einer Probe und eines zweiten Farbstoffs zum Nachweis des gewünschten Proteins. Durch diese Multiplexing-Funktion  können Sie die Übertragungseffizienz bewerten und Ladefehler mittels Normalisierung ausgleichen.