Invitrogen™ Catalase Colorimetric Activity Kit

Beschreibung

Das Katalase-Aktivitäts-Kit für Forschungszwecke ist ein kolorimetrischer Aktivitäts-Assay zur Quantifizierung und Detektion der Katalase-Aktivität in Serum, Plasma, Zellen, Geweben und Erythrozytenlysaten.

Dieses gebrauchsfertige Komplettkit enthält durchsichtige 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Katalase-Standard (100 Einheiten/ml), Katalase-Substrat und andere Komponenten zur Durchführung des Assays. Ein 96-Well-Mikrotiterplatten-Lesegerät, das die optische Dichte bei 560 nm ablesen kann (zulässiger Bereich: 540 – 580 nm) ist für die Verwendung dieses Kits erforderlich.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: kolorimetrisches Aktivitäts-Kit
• Probentypen: Serum, Plasma, Zellen, Gewebe und Erythrozytenlysate.
• Empfindlichkeit: 0,052 U/ml
• Standardkurvenbereich: 0,15 U/ml – 5,0 U/ml
• Reaktivität: Artunabhängig

Hintergrund
Wasserstoffperoxid ist eine der am häufigsten vorkommenden reaktiven Sauerstoffspezies. Es wird entweder in der Umwelt oder als Nebenprodukt des aeroben Stoffwechsels, der Superoxidbildung und der Dismutation oder als Produkt der Oxidase-Aktivität gebildet. Sowohl exzessiver Wasserstoffperoxid als auch sein Zersetzungsprodukt Hydroxyl-Radikal, das in einer Fenton-Reaktion gebildet wird, sind für die meisten Zellbestandteile schädlich. Seine schnelle Entfernung ist für alle aerobisch lebenden prokaryotischen und eukaryotischen Zellen unerlässlich. Wasserstoffperoxid kann jedoch als zweiter Botenstoff in Signaltransduktionswegen, bei der Immunzellaktivierung, bei Entzündungsvorgängen, bei der Zellproliferation und bei der Apoptose fungieren.

Eine der effizientesten Methoden zur Entfernung von Peroxid ist das Enzym Katalase, das von einem einzigen Gen kodiert wird und über verschiedene Spezies hinweg in hohem Maße konserviert ist. Säugetiere, einschließlich Menschen und Mäuse, exprimieren Katalase in allen Geweben und eine hohe Katalasekonzentration ist in der Leber, den Nieren und den Erythrozyten zu finden. Die Expression wird auf Transkription-, Post-Transkription- und Post-Translationsebene reguliert. In Peroxisomen wird eine hohe Katalase-Aktivität nachgewiesen. In jüngster Zeit hat sich gezeigt, dass kurzwellige UV-Strahlung durch die Wirkung von Katalase reaktive Sauerstoffarten (ROS) erzeugt. Diese Reaktion dient als Mechanismus zum Schutz der DNA, indem schädliche UV-Strahlung in ROS-Spezies umgewandelt wird, die durch zelluläre Antioxidansenzyme metabolisiert und entgiftet werden können. Dieser Assay wurde für Serum-, EDTA- und Heparinplasmen einer Vielzahl von Spezies validiert.

Assay-Prinzip
Das Katalase-Aktivitätskit wurde entwickelt, um die Katalase-Aktivität in einer Vielzahl von Proben quantitativ zu bestimmen. Ein Rinder-Katalase-Standard wird zur Erstellung einer Standardkurve für den Assay bereitgestellt und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Die Proben werden im mitgelieferten Assaypuffer verdünnt und in die Wells einer halbflächenfreien Platte gegeben. Wasserstoffperoxid wird jedem Well zugesetzt. Anschließend wird die Platte 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Das mitgelieferte kolorimetrische Nachweisreagenz wird hinzugefügt, gefolgt von verdünnter Meerrettich-Peroxidase, und 15 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die HRP reagiert mit dem Substrat in Gegenwart von Wasserstoffperoxid, um das farblose Substrat in ein rosafarbenes Produkt umzuwandeln. Das farbige Produkt wird bei 560 nm abgelesen. Eine Erhöhung der Katalase in den Proben führt zu einer Abnahme der Wasserstoffperoxidkonzentration und einer Verringerung des rosa Produkts.

Definition der Katalase-Einheit
Eine Einheit der Katalase zersetzt ein Mikromol Wasserstoffperoxid pro Minute bei 25 °C und pH 7,0.