Invitrogen™ Cyclic AMP Competitive ELISA Kit

Beschreibung

Der kompetitive ELISA für zyklisches AMP quantifiziert cAMP in Zell- oder Gewebelysaten. Der Assay erkennt ausschließlich natürliche und rekombinante zyklische AMP. Verfahrensprinzip Der zyklische AMP-Sandwich-ELISA (Enzym-Linked Immunosorbent Assay) misst die Menge des Zieles, das zwischen einem zusammenpassenden Antikörperpaar gebunden ist. Ein zielspezifischer Antikörper wurde in den Wells der mitgelieferten Mikrotiterplatte vorbeschichtet. Proben, Standards oder Kontrollen werden dann in diese Wells gegeben und binden an den immobilisierten Antikörper (Capture). Das Sandwich wird durch den Zusatz des zweiten Antikörpers (Detektor) gebildet, der an ein anderes Epitop des Capture-Antikörpers gebunden ist. Ein konjugiertes Enzym wurde in den Assay integriert. Nach Inkubations- und Waschschritten zur Säuberung der Mikrotiterplatte von ungebundenen Substanzen wird eine Substratlösung hinzugefügt, die mit dem Enzym-Antikörper-Zielkomplex reagiert, um ein messbares Signal zu erzeugen. Die Intensität dieses Signals ist umgekehrt proportional zur Konzentration des in der Originalprobe vorhandenen Ziels. Strenge Validierung Jede hergestellte Charge dieses ELISA-Kits ist auf Kriterien wie Empfindlichkeit, Spezifität, Präzision und Chargenkonsistenz geprüft. Weitere Informationen zur Validierung werden in der Bedienungsanleitung angegeben.

Zyklisches Adenosinmonophosphat (cAMP) spielt bei Transduktionsereignissen nach zahlreichen extrazellulären Signalen eine Schlüsselrolle als intrazellulärer sekundärer Botenstoff. Die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR) sind die größte Familie von Zelloberflächenrezeptoren. Sie können von verschiedenen Liganden aktiviert werden, z. B. von Neurotransmittern, Hormonen, Ionen, kleinen Molekülen, Peptiden und anderen physiologischen Signalmolekülen. Typischerweise aktiviert die Bindung der Liganden an ihren Rezeptor, die zur Aktivierung von G-Proteinen führt, im Gegenzug das Effektormolekül Adenylylcyclase und führt dadurch zur Produktion von cAMP. Die Aktivierung einer Proteinkinase durch cAMP führt zur Phosphorylierung von Substratproteinen. Derzeit erfolgreich vertriebene Medikamente wurden entwickelt, um diese Rezeptoren anzuvisieren. Unter den GPCR sind ∽ 367 Rezeptoren potenzielle Targets für die Arzneimittelentwicklung, aber bisher wurden nur etwa 20 zur Entwicklung therapeutisch und kommerziell erfolgreicher Arzneimittel verwendet. Da die Beteiligung von cAMP die Reaktion der Ligandenbindung verstärken kann, wurde der sekundäre Botenstoff cAMP vor allem eingesetzt, um die Aktivierung der GPCR zu überwachen und dadurch die Entdeckung therapeutischer Wirkstoffe zu erleichtern.