Invitrogen™ GeneBLAzer™ PPAR gamma DA Assay-Kit

Beschreibung

Bei GeneBLAzer™ PPAR-gamma-(Division Arrested)-DA-Zellen und PPAR-gamma-UAS-bla HEK293H-Zellen ist die Ligandenbindungsdomäne (LBD) des humanen Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor-gamma (PPAR-gamma), fusioniert mit der DNA-bindenden Domäne der GAL4, stabil in die GeneBLAzer™ UAS-bla HEK293H-Zelllinie integriert. GeneBLAzer™ UAS-bla HEK293H-Zellen exprimieren stabil ein Beta-Lactamase-Reportergen unter der Transkriptionskontrolle einer Upstream-Aktivator-Sequenz (UAS). Nach Bindung eines Agonisten an die LBD des GAL4 (DBD)-PPAR-gamma (LBD)-Fusionsproteins bindet das Protein an die UAS und induziert so die Expression von Beta-Lactamase. DA-Zellen sind in zwei Konfigurationen erhältlich: Einem Assay-Kit (das Zellen und ausreichend Substrat für die Analyse von einer 384-Well-Platte enthält) und einem Zellröhrchen, das für die Analyse von 10 384-Well-Platten ausreicht. DA-Zellen werden irreversibel mit einer niedrig dosierten Behandlung von Mitomycin C arrestiert und weisen keine offensichtliche Toxizität oder Veränderung der zellulären Signaltransduktion auf. Sowohl PPAR-gamma-DA-Zellen als auch PPAR-gamma-UAS-bla HEK293H-Zellen sind funktionell für Z' und EC₅₀ Konzentrationen von Rosiglitazon validiert. Darüber hinaus wurden PPAR-gamma-UAS-bla HEK293H-Zellen unter variablen Bedingungen auf Assay-Leistung getestet, einschließlich DMSO-Konzentration, Zellzahl und Stimulationszeit.