Invitrogen™ SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit

Das SuperScript® III CellsDirect cDNA-Synthese-Kit ist für die Synthese von Erststrang-cDNA direkt aus einem Säugetierzelllysat optimiert, ohne zuvor die RNA zu isolieren. Lyse und reverse Transkription werden im gleichen Röhrchen durchgeführt, und die daraus resultierende Erststrang-cDNA ist für Klonierung und PCR einsatzbereit. Informationen zur quantitativen Real-Time RT-PCR finden Sie im folgenden Hinweis.

Zu den Vorteilen des SuperScript® III CellsDirect cDNA Synthesis Kit gehören:

• Kompatibel mit einer Vielzahl von Säugetierzelltypen, die unter verschiedenen Behandlungsbedingungen kultiviert werden
• Einzelröhrchenformat minimiert Reagenzienverlust, Probenverlust und Bearbeitungszeit
• Das Gesamtlysatvolumen wird bei der Erststrang-Synthesereaktion für cDNA verwendet, wodurch eine begrenzte Anzahl von Zellen mit höheren Ausbeuten erzielt wird und seltene Transkripte nachgewiesen werden können
• SuperScript® III Reverse Transkriptase mit verringerter RNase H-Aktivität und höherer thermischer Stabilität erzeugt hohe Ausbeuten an cDNA in der Erststrang-Synthesereaktion für eine höhere Empfindlichkeit und einen verbesserten Nachweis seltener Transkripte
• Generiert hochwertige cDNA für die Verwendung in einer Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Klonierung und PCR
• Einfaches Protokoll, das weniger als 2 Stunden dauert

Funktionsweise
Bei der herkömmlichen RT-PCR muss in einem sehr zeitaufwändigen Verfahren zuerst RNA aus Zellen isoliert werden, was zu Materialverlust führen kann. Mit dem SuperScript® III CellsDirect cDNA-Synthesesystem werden die Zellen lysiert und die cDNA aus dem Lysat in einem einzigen Röhrchen mit minimalem Aufwand und ohne Probenverlust erzeugt. DNase I wird zugegeben, um genomische DNA vor der Erststrangsynthese zu eliminieren. Dieses Kit wurde für kleine Zellproben optimiert, von 10.000 Zellen bis hin zu einer einzelnen Zelle (gemessen mittels serieller Verdünnung). Die Verwendung von SuperScript® III Reverse Transkriptase gewährleistet eine hohe Spezifität und hohe Ausbeuten von cDNA aus kleinen Mengen des Ausgangsmaterials, wenn nur 10 pg Gesamt-RNA verwendet wird. Nach der Synthese kann die Erststrang-cDNA mit spezifischen Primern mittels PCR amplifiziert werden, ohne dass Zwischenschritte wie organische Extraktionen oder Ethanolfällungen notwendig sind.