Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR kompetitives Gamma-Bindungs-Assay-Kit, Kaninchen

Beschreibung

Dieses Kit enthält Kaninchen-Tb-Anti-GST-Antikörper; andere Kit-Komponenten sind identisch mit Kit PV4894:

Der LanthaScreen™ TR-FRET-Konkurrenzbindungstest für PPAR-gamma bietet eine empfindliche und robuste Methode zum Hochdurchsatz-Screening (HTS) von Liganden für den Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor-gamma (PPAR-gamma). Das Kit verwendet einen mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper, einen fluoreszierenden Kleinmolekül-pan-PPAR-Liganden (Fluormone™ pan-PPAR grün) und eine mit Glutathion S-Transferase (GST) getaggte ligandenbindende Domäne (LBD) für humanes PPAR-gamma im Format eines Assays mit einem homogenen gebrauchsfertigen Gemisch.

Zur Ausführung des Assays:
Bei der Ausführung des LanghaScreen™ TR-FRET Konkurrenzbindungstests für PPAR-gamma wird Fluormone™ pan-PPAR Grün zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einem Gemisch aus PPAR-gamma-LBD und Terbium-Anti-GST-Antikörper. Wenn Fluormon™ pan-PPAR Grün an PPAR-gamma gebunden ist, erfolgt eine Energieübertragung vom Terbium-markierten Antikörper zum Tracer, und es wird ein hohes TR-FRET-Verhältnis beobachtet. Die kompetitive Ligandenbindung an PPAR-gamma wird anhand der Fähigkeit einer Testverbindung nachgewiesen, den Tracer zu verdrängen, was zu einem FRET-Verlust zwischen dem Antikörper und dem Tracer führt. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das 520 nm/495 nm-TR-FRET-Verhältnis berechnet und zur Bestimmung der IC50 aus einer Dosis-Reaktions-Kurve der Verbindung verwendet (Abb. 1). Diese Art des Bindungstests ist analog zu Radioliganden-basierten Assays, mit dem Unterschied, dass nicht mit Radioaktivität umgegangen werden muss und ein homogenes, reines Zugabe-Format ermöglicht wird.