Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET-Assay-Kit für RAR-beta-Koaktivator (Ziege)

Beschreibung

Dieses Kit enthält Ziege-Tb-Anti-GST-Antikörper; die anderen Kit-Komponenten sind mit Kit A15137 identisch:

Das LanthaScreen™ TR-FRET Assay-Kit für RAR (Retinsäure-Rezeptor)-beta-Koaktivator bietet eine empfindliche und zuverlässige Methode für das Hochdurchsatz-Screening potenzieller RAR-beta-Liganden als Agonisten der Liganden-abhängigen Koaktivator-Rekrutierung. Das Kit verwendet einen mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper, ein Fluorescein-markiertes Koaktivatorpeptid und eine mit Glutathion-S-Transferase (GST) getaggte Liganden-bindende Domäne für humanes rekombinantes RAR-beta (RAR-beta-LBD) im Format eines Assays mit einem homogenen gebrauchsfertigen Gemisch.

Bei der Ausführung des LanthaScreen™ TR-FRET Assays für RAR-beta-Koaktivator im Agonisten-Modus (zum Nachweis von Agonistenverbindungen) wird RAR-beta-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einem Gemisch aus dem Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-markierten Anti-GST-Antikörper. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das 520 nm/495 nm-TR-FRET-Verhältnis berechnet und kann zur Bestimmung der EC₅₀ aus einer Dosis-Reaktions-Kurve der Verbindung. Diese Liganden-EC basiert auf der Biologie der RAR-beta-Koaktivatorpeptid-Interaktion und₅₀ ist ein zusammengesetzter Wert für die Menge an Liganden, die zur Bindung an den Rezeptor, Induktion einer Konformationsänderung und Rekrutierung von Koaktivatorpeptid erforderlich ist (Abb. 1).

Inhalt und Lagerung:
Das LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assay-Kit für RAR-beta enthält das RAR-beta-LBD- (GST) Protein, fluoreszierend markiertes PGC22-Koaktivatorpeptid, Tb-markierten Anti-GST-Antikörper und mehrere Puffer. Lagerung der Komponenten wie im Assay-Protokoll angegeben (-80 °C, -20 °C oder +4 °C).