Thermo Scientific™ LanthaScreen™ TR-FRET VDR Coactivator Assay Kit, Ziege

Beschreibung

• Dieses Kit enthält Ziege-Tb-Anti-GST-Antikörper; die anderen Kit-Komponenten sind mit Kit A15127 identisch
• Das LanthaScreen™ TR-FRET Vitamin-D Rezeptor (VDR)-Koaktivator-Assay Kit bietet eine empfindliche und zuverlässige Methode für das Hochdurchsatz-Screening potenzieller VDR-Liganden als Agonisten der Koaktivator-Rekrutierung. Das Kit verwendet einen mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper, ein Fluorescein-markiertes Koaktivatorpeptid und eine VDR-Ligandenbindungsdomäne (VDR-LBD), die mit Glutathion-S-Transferase (GST) markiert ist, in einem gebrauchsfertigen homogenen Assay-Format.
• Bei der Ausführung des LanthaScreen™ TR-FRET VDR-Koaktivator-Assays wird VDR-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einem Gemisch aus dem Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-Anti-GST-Antikörper. Nach der Inkubation bei Raumtemperatur wird das TR-FRET 520:495-Emissionsverhältnis berechnet und zur Bestimmung der EC50 anhand einer Dosisreaktionskurve der Verbindung verwendet.
• Basierend auf der Biologie der VDR-Koaktivatorpeptid-Interaktion ist die EC50 dieses Liganden ein zusammengesetzter Wert für die Menge des Liganden, die zur Bindung an den Rezeptor, Induktion einer Konformationsänderung und Rekrutierung des Koaktivatorpeptids erforderlich ist (Abbildung 1).
• Das LanthaScreen™ TR-FRET VDR-Koaktivator-Assay-Kit enthält das VDR-LBD (GST)-Protein, Fluorescein-markiertes TRAP220/DRIP-2-Koaktivatorpeptid, Tb-Anti-GST-Antikörper und Puffer. Lagerung der Komponenten wie im Assay-Protokoll angegeben (-80 °C, -20 °C oder +4 °C).