Macherey-Nagel™ NucleoSpin™ 8 Virus, 8-well kit for viral RNA/DNA purification

NucleoSpin 8 Virus ermöglicht die schnelle gleichzeitige Vorbereitung viraler Nukleinsäuren aus Serum, Plasma und zellfreien biologischen Flüssigkeiten. Die Kits ermöglichen eine zuverlässige Aufreinigung von viraler RNA und DNA ohne Kreuzkontamination. NucleoSpin 8 Virus wurde hauptsächlich für den manuellen Einsatz in einer Zentrifuge entwickelt. Die NucleoSpin 8 Virus-Kernkits ermöglichen eine größere Variation und höhere Flexibilität bei den Verbrauchsmaterialien für Lyse, Wäsche und Elution und werden hauptsächlich für den manuellen oder automatisierten Vakuumeinsatz empfohlen. Mit der NucleoSpin 8 Virus-Methode werden RNA-Viren schnell und effizient durch einen Lysepuffer aus einer hochkonzentrierten GITC-Lösung lysiert. DNA-Viren (z. B. HBV) sind in der Regel schwieriger zu isolieren und erfordern eine Verdauung von Proben mit Proteinase K. Lysepuffer und Ethanol schaffen geeignete Bedingungen für die Bindung von Nukleinsäuren an die Kieselgelmembran der NucleoSpin Virusbindungsstreifen oder -platte. Die im Lysepuffer enthaltene Carrier-RNA verbessert die Bindung und Rückgewinnung der niedrig konzentrierten viralen RNA/DNA. Kontaminationen (potenzielle PCR-Inhibitoren) wie Salze, Metaboliten und lösliche makromolekulare zelluläre Komponenten werden durch Wäsche mit Ethanolwaschpuffern entfernt. Die aufgereinigten viralen Nukleinsäuren können in einem niedrigen Salzpuffer oder Wasser eluiert und und sofort in nachfolgenden Downstream-Prozessen wie RT-PCR oder PCR eingesetzt werden.

Zentrifugation

Zur Zentrifugation mit den NucleoSpin 8 Virus-Kits ist eine Mikrotiterplatten-Zentrifuge erforderlich, die sich zur Aufnahme der auf einem Block mit runden oder rechteckigen Wells oder einem Röhrchenstreifengestell gestapelten NucleoSpin Virus-Streifen/Platte eignet und Beschleunigungen von 5.600 – 6000 x g (Becherhöhe: 85 mm) erreicht. Für die Zentrifugenverarbeitung der 8-Well-Streifen wird das wiederverwendbare Starterset C mit Säulenhalter C, Blindstreifen, quadratischen MN-Well-Blöcken und Röhrchenstreifen benötigt.

Vakuumverarbeitung

Die NucleoSpin 8 Virus-Kits können manuell mit dem NucleoVac 96-Vakuumverteiler verwendet werden. Zur Vakuumverarbeitung der 8-Well-Streifen ist das wiederverwendbare Starterset A mit Säulenhaltern und Blindstreifen erforderlich. Zur automatischen Bearbeitung auf Laborplattformen mit Vakuumkammern mit 96-Well-Standardplatten ist außerdem der Startersatz A erforderlich.

Inhalt des Kits: NucleoSpin Virus-Bindungsstreifen, quadratische MN-Well-Blocks, Gestelle mit Röhrchenstreifen, Kappenstreifen, selbsthaftende Folie, Puffern Träger-RNA, Proteinase K.

• Elutionsvolumen: 70 bis 100 μl
• Typische Rückgewinnung (Recovery): > 90 %
• Bindungsvermögen: 40μ g
• Vorbereitungszeit: 60 Min/6 Streifen