OPTIZYME™ EcoRI, Fisher BioReagents™

Beschreibung

5'...G^A A T T C...3'
3'...C T T A A^G...5'

Bedingungen für 100 %-Aktivität:

• 1x OPTIZYME Puffer EcoRI: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5 bei 37 °C), 10 mM MgCl2, 100 mM KCl, 0.02 % Triton X-100 und 0.1 mg/ml BSA.
• Bei 37 °C inkubieren

Im Lieferumfang enthalten: 10x OPTIZYME EcoRI-Puffer
Enzymaktivität in OPTIZYME Puffern:

• Puffer 1: 0 Bis 20 %
• Puffer 2: Keine Reaktion
• Puffer 3: 100 %
• Puffer 4: Keine Reaktion
• Puffer 5: 100 % ™

™ Star-Aktivität tritt bei mehr als 5-facher Überverdauung auf (5 Einheiten x 1 Stunde)
Lagerungspuffer:
10mM Kaliumphosphat (pH 7.4 bei 25 °C), 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.15 % Triton X-100 und 50 % (v/v) Glycerin.
Ligation und erneutes Schneiden:
Mehr als 95 % der DNA-Fragmente können mit EcoRI nach einer 50-fachen Überverdauung ligiert und erneut geschnitten werden.
Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:
Für die vollständige Verdauung von 1 μg Agarose-eingebetteter Lambda-DNA innerhalb von 16 Stunden ist ein Minimum an 5 Einheiten von EcoRI erforderlich.
Hinweis: Eine niedrige Salzkonzentration, ein großer Überschuss des Enzyms, pH-Werte > 8.0 oder der Ersatz von Mg²⁺ durch Mn²⁺ kann zu einer Star-Aktivität führen.
Kompatible Enden: XapI, MunI, TasI.
Methylierungseffekte:
Dam: nie überlappend – keine Auswirkung.
Dcm: nie überlappend – keine Auswirkung.
CpG: kann überlappen – Schneiden ist beeinträchtigt.

• 5'...m5C GAATTm5C G...3'

3'... Gm5CTTAA Gm5...5'

EcoKI: nie überlappend – keine Auswirkung.

EcoBI: kann überlappend – keine Auswirkung.

• 5'...TGm6AATTC(N)₄TGCT...3'

3'...AC TTAAG(N)₄m6ACGA...5'