Thermo Scientific™ TMTsixplex™ Reagenzset zur Isobarenmarkierung

Aminreaktive Thermo Scientific TMT™ Isobarische Massenmarkierungskits und -Reagenzien ermöglichen die Multiplex-Quantifizierung von Proteinen, die aus Zellen und Geweben mithilfe der Tandem-Massenspektrometrie extrahiert wurden.

Tandem Mass Tag™ 6-Plex (TMTsixplex™) Reagenzien sind Mengen isobarischer Verbindungen (d. h. gleiche Masse und Struktur, auch Isotopomere genannt), die für kovalente, irreversible Markierung von primären Aminen (–NH2)-Gruppen NHS-aktiviert sind. Jedes isobare Reagenz enthält eine andere Anzahl schwerer Isotope im Massenreporterbereich, was zu einer einzigartigen Reportermasse während der Tandem-MS/MS für die Probenidentifizierung und relative Quantifizierung führt. Die Reagenzien markieren alle Peptide, die aus Zell- oder Gewebeproben zur Analyse von bis zu sechs Proben in einer einzigen MS-Analyse hergestellt wurden.

Merkmale des TMTsixplex Label Reagent Set:

• Leistungsstark – Die gleichzeitige MS-Analyse mehrerer Proben erhöht den Probendurchsatz und ermöglicht die relative Quantifizierung von bis zu sechs verschiedenen Proben aus Zellen, Geweben oder biologischen Flüssigkeiten
• Konsistent – Identische Reagenzstruktur und -leistung unter TMTzero™, TMTduplex™, TMTsixplex™ und TMT10plex™ Reagenzien ermöglichen einen effizienten Übergang von der Methodenentwicklung zur Multiplex-Quantifizierung und so die Erforschung von Biomarkern über Plattformen und Datensätze hinweg
• Robust – Konsistente Chemie ermöglicht einen effizienten Übergang von der Methodenentwicklung zur Multiplex-Quantifizierung und so die Biomarkerforschung
• Effizient – Aminreaktive NHS-Ester-aktivierte Reagenzien gewährleisten eine effiziente Markierung aller Peptide unabhängig von Proteinsequenz oder proteolytischer Enzymspezifität
• Kompatibel – Optimiert für die Verwendung mit hochauflösenden Thermo Scientific MS/MS-Plattformen wie Q Exactive, Orbitrap Elite™ und Orbitrap Fusion™ Tribrid™ Geräten mit einer Datenanalyse, die vollständig von Proteome Discoverer™ 1.0 und höher unterstützt wird

Anwendungen:
• Proteinidentifizierung und -quantifizierung aus mehreren Zell-, Gewebe- oder biologische Flüssigkeitsproben
• Erstellen von Proteinexpressionsprofilen für normale bzw. kranke Zustände oder für Kontrollproben bzw. behandelte Proben
• Gleichzeitige Messung von bis zu sechs verschiedenen Proben in einem einzigen Experiment
• Quantitative Analyse von Proteinen, für die keine Antikörper verfügbar sind
• Identifizierung und Quantifizierung von Membran- und post-translational modifizierten Proteinen
• Identifizierung und Quantifizierung von Hunderten bis Tausenden Proteinen in einem einzigen Experiment

Veränderungen der Proteinexpression und post-translationale Modifikationen sind wesentliche Mechanismen der biologischen Regulation und Krankheit. Die Fortschritte in den Bereichen Flüssigchromatographie (LC), Massenspektrometrie (MS) und Bioinformatik ermöglichen es Forschern heute, Tausende von Proteinen in einer bestimmten Probe mit einem hohen Grad an Zuverlässigkeit zu identifizieren. Der reproduzierbare Nachweis und die Quantifizierung verschiedener Proteine in Proben mit Massenspektrometrie ist jedoch aufgrund der Variabilität in der Peptidtrennung, -ionisierung und -detektion eine Herausforderung.

TMT-Reagenzien (Tandem Mass Tag) sind isobarische chemische Tags, die die gleichzeitige Identifizierung und Quantifizierung von Proteinen in verschiedenen Proben mithilfe der Tandem-Massenspektrometrie ermöglichen. Die aminreaktiven, NHS-Ester-aktivierten Verbindungen werden mit hoher Effizienz kovalent an den Peptid-Amino-Terminus und die freien Amino-Termini von Lysin-Resten von Peptiden und Proteinen angebracht, wodurch alle Peptide in einer bestimmten Probe unabhängig vom Enzym, das für die Verdauung verwendet wird, markiert werden. Da TMT-Reagenzien eine identische Struktur und Masse haben (d. h. Isotopomere sind), werden markierte Peptide während der Trennung durch Flüssigkeitschromatographie (LC) gemeinsam eluiert und während der Analyse mit Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS) gemeinsam isoliert, was zu weniger fehlenden Peptididentifikationen unter den Proben führt. Während der MS/MS-Analyse wird jeder isobare Tag ebenfalls fragmentiert, um eine eindeutige, zur Probenidentifizierung und Quantifizierung dienende Reporterionenmasse zu erzeugen. Die Proteinquantifizierung erfolgt durch den Vergleich der relativen Intensitäten der sechs Reporterionen in den MS/MS-Spektren.

Die Tandem Mass Tag (TMT) Reagenzienfamilie besteht aus TMTzero, TMTduplex, TMTsixplex und TMT10plex Sets, die speziell für einen schnellen und kostengünstigen Übergang von der Methodenentwicklung zur Proteinquantifizierung mit hohem Durchsatz entwickelt wurden. Der TMTzero-Tag ermöglicht das Testen und Optimieren der Probenvorbereitung, Markierung, Fraktionierung und MS-Fragmentierung für den Peptid- und Reporternachweis ohne teurere isotopenmarkierte Verbindungen. Der TMTsixplex Reagenzsatz ermöglicht das Erstellen von 6-Plex-Proteinprofilen für mehrere Bedingungen, wie Zeitverläufe, Dosisreaktionen, Replikate oder Probenvergleiche. Jeder TMT Tag basiert auf der gleichen chemischen Struktur, sodass zwischen Experimenten keine Änderungen an Markierungs- oder HPLC-Trennungsbedingungen erforderlich sind.

TMT Reagenzien werden als einzelne Sets oder in optimierten Kit-Formaten geliefert, die alle erforderlichen Reagenzien und Kontrollsubstanzen enthalten, um maximale Flexibilität, Komfort und Zuverlässigkeit zu gewährleisten. Tandem Mass Tag Reagenzien in Kombination mit den branchenführenden Thermo Scientific Geräten und der Software bieten integrierte Gesamtsystemlösungen für die quantitative Proteinexpressionsanalyse.

Weitere Produktdaten
• Quantitative Krebsstammzell-Phosphoprotein-Profilierung

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Für hochauflösende Analysen der TMT-markierten Peptide ist die empfohlene LC-Säule für die Nanospray Flex Quelle die Acclaim PepMap 100 C18 LC Säule (Best.-Nr. 164942 oder 164939). Die empfohlene LC-Säule für eine EASY-Spray Quelle ist die EASY-Spray C18 LC-Säule (Best.-Nr. ES802 oder ES803)