Invitrogen™ Superoxide Dismutase (SOD) Colorimetric Activity Kit

Das Superoxid-Dismutase-Aktivitäts-Nachweiskit ist ein kolorimetrischer Aktivitätsassay, der für die Quantifizierung und Detektion der Superoxid-Dismutase-Aktivität in Serum, Plasma, Zellen, Geweben und Erythrozyten-Lysaten entwickelt wurde.

Dieses gebrauchsfertige Komplettkit enthält transparente 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Superoxid-Dismutase-Standard (1 Einheit/Fläschchen), Superoxid-Dismutase-Substrat und weitere Komponenten für die Durchführung des Assays. Für die Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das die optische Dichte bei 450 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: kolorimetrisches Aktivitätskit
• Probentypen: Serum-, Plasma-, Zellen-, Gewebe- und Erythrozytenlysate
• Empfindlichkeit: 0,044 U/ml
• Standardkurvenbereich: 0,06 bis 4 U/ml
• Reaktivität: Artunabhängig

Hintergrund
Kurzlebige und hochreaktive Sauerstoffspezies (ROS) wie Superoxid, Hydroxylradikal und Wasserstoffperoxid werden kontinuierlich in vivo erzeugt. Im Ruhezustand reicht das Gleichgewicht zwischen Antioxidantien und Oxidantien aus, um die Störung normaler physiologischer Funktionen zu verhindern. Jedoch kann entweder eine Erhöhung der Oxidantien oder eine Verringerung der Antioxidantien dieses Gleichgewicht stören, was zu erhöhten Konzentrationen reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) führt. Die zellulären Konzentrationen von ROS werden durch antioxidative Enzyme und Antioxidantien mit kleinen Molekülen kontrolliert. Die wichtigsten Antioxidansenzyme, Superoxid-Dismutasen (SODs), einschließlich Kupfer-Zink-Superoxid-Dismutase (Cu/ZnSOD, SOD1), Mangan-Superoxid-Dismutase (MnSOD, SOD2) und extrazelluläre Superoxid-Dismutase (EC-SOD, SOD3) spielen alle eine entscheidende Rolle beim Abfangen von Superoxid.

Eine verminderte SOD-Aktivität führt zu einem erhöhten Superoxidlevel, was wiederum zu verminderten NO-, aber erhöhten Peroxynitritkonzentrationen führt. Die wichtigste intrazelluläre SOD ist eine 32-kD-Kupfer-Zink-SOD, die Homodimer (Cu/Zn-SOD) enthält. Die mitochondriale SOD (MnSOD) ist ein manganhaltiger 93-kD-Homotetramer, der im Zytoplasma synthetisiert und in die innere Matrix der Mitochondrien translokiert wird. Dieser Assay wurde für Serum- und Urinproben validiert. Superoxid-Dismutasen sind antioxidative Enzyme, die sich ähnlich wie das kolorimetrische Substrat verhalten sollten. Dieser Assay soll die SOD-Aktivität aus einer Vielzahl von Quellen messen.

Assay-Prinzip
Das Superoxid-Dismutase-Aktivitätskit wurde entwickelt, um SOD-Aktivität in einer Vielzahl von Proben quantitativ zu messen. Der Assay misst alle Arten von SOD-Aktivität, einschließlich Cu/Zn-, Mn- und FeSOD-Typen. Ein boviner Erythrozyt-SOD-Standard wird zur Erstellung einer Standardkurve für den Assay bereitgestellt und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Die Proben werden in unserem speziell gefärbten Probenverdünnungsmittel verdünnt und in die Wells gegeben. Zunächst wird das Substrat, dann das Xanthinoxidase-Reagenz hinzugefügt und 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Die Xanthinoxidase erzeugt Superoxid in Gegenwart von Sauerstoff, das ein farbloses Substrat im Nachweisreagenz in ein gelb gefärbtes Produkt umwandelt. Das farbige Produkt wird bei 450 nm abgelesen. Eine Erhöhung der SOD-Konzentrationen in den Proben führt zu einer Abnahme der Superoxidkonzentration und einer Reduktion des gelben Produkts.

Definition der SOD-Einheit
Eine Einheit von SOD ist definiert als die Enzymmenge, die die Hälfte der maximalen Hemmung der Reduktion von 1,5 mM Nitroblautetrazolium in Gegenwart von Riboflavin bei 25 °C und pH 7,8 verursacht.