Thermo Scientific™ TMT10plex™ Reagenzienset zur Isobarenmarkierung

Beschreibung

TMT10plex Isobaric Label Reagents and Kits contain ten isobaric compounds with the same mass and chemical structure (i.e., isotopomeric) composed of an amine-reactive NHS-ester group, a spacer arm, and a mass reporter. Up to ten different peptide samples prepared from cells or tissues can be labeled in parallel and then combined for analysis. For each sample, a unique reporter mass (i.e., TMT10 126-131 Da) in the low-mass region of the high-resolution MS/MS spectrum is used to measure relative protein expression levels during peptide fragmentation and tandem mass spectrometry.

Änderungen der Proteinexpression und post-translationale Modifikationen sind wesentliche Mechanismen der biologischen Regulation und Krankheitsentstehung. Technische Fortschritte in der Massenspektrometrie (MS) und Bioinformatik sowie neue Quantifizierungsmethoden wie die markierungsfreie Quantifizierung, metabolische Markierung und das chemische Tagging ermöglichen es Forschern nun, Tausende von Proteinen in einer bestimmten Probe mit einem hohen Grad an Genauigkeit zu identifizieren und quantitativ zu analysieren.^{1, 2}
Isobare chemische Tags sind leistungsstarke Werkzeuge, die die gleichzeitige Identifizierung und Quantifizierung von Proteinen in verschiedenen Proben mithilfe der Tandem-Massenspektrometrie ermöglichen. Dies sind kleine chemische Moleküle mit identischer Struktur, die kovalent an die freien Aminoenden der Lysinreste von Peptiden und Proteinen binden. Auf diese Weise lassen sich verschiedene Peptide in einer Probe markieren. Während der MS/MS-Analyse erzeugt jedes isobare Tag eine eindeutige Reporter-Ionen-Signatur, die eine Quantifizierung ermöglicht. In einer regulären MS-Analyse sind die markierten Peptide nicht voneinander zu unterscheiden; im Tandem-MS-Modus werden Peptide jedoch isoliert und fragmentiert, und jedes Tag erzeugt ein eindeutiges Reporter-Ion. Die Proteinquantifizierung erfolgt dann durch Vergleich der Intensitäten der sechs Reporter-Ionen in den MS/MS-Spektren.

Leistungsmerkmale:

• Proteinidentifizierung und Quantifizierung mehrerer Proben, die Zellen, Gewebe oder biologische Flüssigkeiten enthalten Konsistente Chemie sorgt für einen Übergang von der Methodenentwicklung zur Multiplex-Quantifizierung und Entdeckung neuer Biomarker Effiziente Markierung von Membranproteinen und posttranslational modifizierten Proteinen Erweiterbares System ermöglicht gleichzeitiges Multiplexing von bis zu sechs verschiedenen Proben in einem einzigen Experiment
• Optimierte Fragmentierung und vollständig unterstützte Quantifizierung mit Proteome Discoverer 1.0 für alle Thermo Scientific LCMS/MS-Plattformen wie LTQ XL und LTQ Orbitrap XL System
• Jedes TMT basiert auf derselben chemischen Struktur, sodass zwischen Experimenten keine Änderung der Markierungs- oder HPLC-Trennungsbedingungen erforderlich ist

Die Tags bestehen aus TMT₀, dem TMT₂ Duplex-Set und dem TMT₆ 6-Plex-Set

• TMT₀-Tag ermöglicht das Testen und Optimieren der Probenvorbereitung sowie Markierung, Fraktionierung und MS-Fragmentierung für die Peptid-Identifizierung und den Reporternachweis ohne teure isotopenmarkierte Verbindungen
• TMT₂-Reagenziensatz ermöglicht das Erstellen von Duplex-Proteinprofilen für kleine Studien
• TMT₆-Reagenziensatz ermöglicht das Erstellen von 6-Plex-Proteinprofilen für mehrere Bedingungen, wie Zeitverläufe, Dosisreaktionen, Replikate oder Probenvergleiche

• Erstellen von Proteinexpressionsprofilen für normale bzw. kranke Zustände oder für Kontrollproben bzw. behandelte Proben
• Quantitative Analyse von Proteinen, für die keine Antikörper verfügbar sind
• Identifizierung und Quantifizierung von Membranproteinen und posttranslational modifizierten Proteinen