Invitrogen™ TrueTag™ Spender-DNA-Kit, HA

• Eine schnelle Lösung zur Förderung eines hocheffizienten (bis zu 100 % bearbeitete Zellen) Gen-Taggings mit transfektionsfähiger Spender-DNA für Genom-Editierungsexperimente
• Das Kit bietet alles, was für die Herstellung eines hochwertigen DNA-Spenders erforderlich ist, um die Gene mit einem Selektionsmarker und HA zu kennzeichnen.
• Es können zwei locus-spezifische Primer bereitgestellt werden, um Homologiearme hinzuzufügen, PCR-Amplifikation und Reinigung für einen transfektionsfähigen Spender in Stunden und nicht in Tagen.
• PCR-Amplifikation in einem Schritt zur Generierung von Spendervorlagen—Kein Klonen erforderlich
• Anreichern von bis zu 100 % HA-markierte Zellen

Jedes Kit soll Anwendern Folgendes ermöglichen:

• Markieren des Carboxy- (C-) oder Amino- (N-) Terminus des Gens von Interesse
• Auswahl aus Puromycin oder Blasticidin Selektionsmarker — je nachdem, was dem Zellmodell am besten entspricht
• Einfaches Entfernen von Antibiotika-Resistenzmarkern mit Cre/Lox nach der Zellanreicherung

Im Kit enthalten:

• Vier Vorlagen für lineare Spender: N-Terminus/Puromycin-Resistenz, N-Terminus/Blasticidin-Resistenz, C-Terminus/Puromycin-Resistenz, C-Terminus/Blasticidin-Resistenz
• Phusion Flash High-Fidelity PCR Master Mix
• PCR-Reinigungssäulen und -Puffer
• Positivkontrollprimer zur Markierung von humanem Beta-Aktin (ACTB)

Intuitive Software zur schnellen Entwicklung genspezifischer Reagenzien

Target-spezifische Reagenzien für die Genbearbeitung sind für das ordnungsgemäße Knock-in des fluoreszierenden Tags erforderlich. Die webbasierte Software Invitrogen TrueDesign Genome Editor erledigt die Designarbeit für Sie:

1. Identifizieren des Target-Gen-Transkripts
2. Festlegen der Einfügestelle
3. Entwurf und einfache Bestellung aller erforderlichen Komponenten

Benötigte Reagenzien sind über die TrueDesign Software erhältlich (nicht im Kit enthalten):

• CRISPR Guide RNA oder TALENs, die neben N- oder C-Terminus entwickelt wurden
• Oligos zur PCR-Amplifikation des Spenders und Hinzufügen geeigneter Homologiearme
• Sequenzierungs-Primer für die Beurteilung der CRISPR-Cas9-Spaltungseffizienz
• Verifizierungsprimer zur Validierung des korrekten Einsetzens des TrueTag DNA-Spenders

Auch separat oder als Teil des TrueDesign-Arbeitsablaufs erforderlich und erhältlich:

• TrueCut Cas9 Protein v2, TrueCut HiFi Cas9 Protein oder GeneART CRISPR mRNA
• CRISPRMAX Transfektionsreagenz oder MessengerMAX Transfektionsreagenz