Invitrogen™ Acetylcholinesterase Fluorescent Activity Kit

Das Kit zum Nachweisen der Acetylcholinesterase-Fluoreszenzaktivität, das nur für Forschungszwecke verwendet wird, ist ein Fluoreszenzaktivitäts-Assay, der für die Quantifizierung und den Nachweis der Acetylcholinesterase-Aktivität in Serum-, Plasma- und Erythrozytmembranproben entwickelt wurde.

Dieses vollständige, gebrauchsfertige Kit enthält schwarze 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Acetylcholinesterase-Standard (1.000 mU/ml), Acetylcholinesterase-Substrat, Acetylthiocholiniodid und andere Komponenten für die Durchführung des Assays. Für die Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well-Fluoreszenz-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das Fluoreszenzemissionen bei 510 nm mit Anregung bei 390 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: Fluoreszenzaktivitäts-Kit
• Probentypen: Serum-, Plasma- und Erythrozytenmembranproben
• Empfindlichkeit: 0,218 mU/ml
• Standardkurvenbereich: 6,25 – 100 mU/ml
• Reaktivität: Artunabhängig

Hintergrund
Acetylcholin (ACh) ist ein wesentlicher Neurotransmitter im zentralen und peripheren Nervensystem. Im Gehirn gibt es mehrere Bereiche, in denen cholinerge Neuronen konzentriert sind. Nikotin- und Muskarin-ACh-Rezeptoren werden als Bindungs- und Effektorproteine erkannt, um chemische Neurotransmission an Neuronen, Ganglien, Herz und glatten Muskelfasern und Drüsen zu vermitteln.

Die Acetylcholinesterase wird durch das einzelne AChE-Gen kodiert; die strukturelle Vielfalt in den Genprodukten ergibt sich aus alternativen mRNA-Spleißen und posttranslationalen Verbindungen von katalytischen und strukturellen Untereinheiten. Die Hauptform der Acetylcholinesterase, die im Gehirn, in Muskeln und anderen Geweben vorzufinden ist, ist die hydrophile Spezies, die Oligomere mit Disulfidbrücken mit kollagenhaltigen, lipidhaltigen strukturellen Untereinheiten bildet. Die andere wechselseitig gespleißte Form, die hauptsächlich in den erythroiden Geweben exprimiert wird, ist am C-terminalen Ende strukturell verschieden und enthält ein spaltbares Peptid mit einem GPI-Anker. Es verbindet sich mit Membranrezeptoren durch Phosphoinositid-Komponenten, die nach der Translationsektion hinzugefügt werden. Dieser Assay wurde für Serum-, EDTA- und Heparinplasma sowie für gelöste RBC-Ghosts einer Vielzahl von Spezies validiert.

Assay-Prinzip
Das Acetylcholinesterase-Aktivitätskit wurde entwickelt, um die Acetylcholinesterase-Aktivität in einer Vielzahl von Proben quantitativ zu bestimmen. Ein humaner AChE-Standard wird zur Erstellung einer Standardkurve für den Assay bereitgestellt, und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Das Kit verwendet ein firmeneigenes, nicht fluoreszierendes Molekül, das kovalent an das Thiolprodukt der Reaktion zwischen dem AChE-Substrat und AChE in den Standards oder Proben bindet und ein Fluoreszenzprodukt ergibt, das bei 510 nm in einem Fluoreszenz-Plattenlesegerät mit Anregung bei 390 nm abgelesen wird. Das Kit eignet sich zur Messung der AChE-Aktivität in entsprechend verdünnten Serum-, Plasma- und RBC-Ghosts einer Reihe von Spezies. Außerdem wird AChE in extrahierten Gewebeproben und Zelllysaten gemessen.

Definition der AChE-Einheit
Eine Einheit hydrolysiert 1,0 μmol Acetylthiocholiniodid pro Minute bei pH 7,4 und 37 °C.