Invitrogen™ Alexa Fluor™ 405 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 405 ist ein blau fluoreszierender Farbstoff, der optimal für den Einsatz mit dem 405 nm-Violettlaser geeignet ist. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 405, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und im Bereich von pH 4 bis pH 10 pH-unempfindlich. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Farbstoff Alexa Fluor™ 405 konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Markierungssubstanzen und Amplifikationssubstraten an, die für die Markierung und den Nachweis von Zellen optimiert wurden.

Der NHS-Ester (oder Succinimidyl-Ester) von Alexa Fluor™ 405 ist die am häufigsten verwendete Substanz, um den Farbstoff an ein Protein oder Antikörper zu konjugieren. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH2) von Proteinen, Amin-modifizierten Oligonukleotiden und weiteren aminhaltigen Molekülen verwendet werden. Das entstehende Konjugat mit Alexa Fluor™ weist eine hellere Fluoreszenz und höhere Fotostabilität als Konjugate mit anderen Fluorophoren mit ähnlichem Spektrum auf.

Ausführliche Informationen zu diesem Alexa Fluor™ NHS-Ester:

Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 405 Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, Amin-modifizierte Oligonukleotide
Ex/Em des Konjugats: 400/424 nm
Extinktionskoeffizient: 35.000 cm-1M-1
Farbstoffe mit ähnlichem Spektrum: Pacific Blue
Molekulargewicht: 1028,3

Typische Konjugationsreaktion
Amin-reaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden unter Verwendung von drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der Alexa Fluor™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 – 0,2 M-Natriumbicarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysin, erreichen Sie eine bessere selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Reinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:

• Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1mg
• Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 µg
• Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 µg

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl von Molecular Probes Kits zur Markierung von Antikörpern und Proteinen, die sich für Ihr Ausgangsmaterial und Ihre Versuchsanordnung eignen.

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