Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Alexa Fluor™ Farbstoffe sind reaktive Moleküle, die verwendet werden können, um den primären Aminen (R-NH2) von Proteinen, aminmodifizierten Oligonukleotiden und anderen aminhaltigen Molekülen eine fluoreszierende Markierung hinzuzufügen. Die daraus resultierenden Alexa Fluor™ Konjugate weisen eine hellere Fluoreszenz und höhere Fotostabilität auf als die Konjugate anderer spektral ähnlicher Fluorophore. Alexa Fluor™ 488 TFP-Ester erzeugt ein Konjugat mit Anregung/Emission von 495/515 nm, das spektral Fluorescein- (FITC) und Cy2-Konjugaten ähnelt.

Alexa Fluor™ Farbstoffe sind mit Fluoreszenz-Emissionen erhältlich, die das sichtbare und nahinfrarote Spektrum umfassen (siehe The Alexa Fluor™ Dye Series—Note 1.1 im Handbuch von Molecular Probes™) und eine einzigartige Kombination aus Wasserlöslichkeit und pH-Unempfindlichkeit zwischen pH 4 und pH 10 für Kompatibilität in verschiedenen biologischen Umgebungen bieten.

Tetrafluorphenyl(TFP)-Ester stellen eine Verbesserung gegenüber der Succinimidyl-Ester-Chemie (SE- oder NHS-Ester) dar, die normalerweise zum Anhängen von Fluorophoren oder Haptenen an die primären Amine von Biomolekülen verwendet wird. Beide reaktiven Chemien erzeugen die gleiche starke Amidbindung zwischen dem Farbstoff oder dem Hapten und der interessierten Verbindung, aber die TFP-Ester sind weniger anfällig für die spontane Hydrolyse während der Konjugationsreaktion. Alexa Fluor™ TFP-Ester sind mehrere Stunden lang bei dem pH-Grundwert stabil, der normalerweise für die Reaktion verwendet wird, und damit viel länger als Succinimidylester.

Typische Konjugationsreaktion
Amin-reaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden; das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert. Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden, für die drei unterschiedliche molare Verhältnisse von reaktivem Reagenz zu Protein verwendet werden.

Der Alexa Fluor™ TFP-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 – 0,2 mol Natriumbikarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysins, erreichen Sie möglicherweise eine stärker selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gel-Filtrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze, oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse.

Erfahren Sie mehr über die Markierung von Proteinen und Antikörpern
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Kits zur Markierung von Antikörpern und Proteinen, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierung von A bis Z, oder Sie nutzen unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Um mehr über unsere Markierungskits zu erfahren, lesen Sie Kits for Labeling Proteins and Nucleic Acids, Abschnitt 1.2 im Handbuch von Molecular Probes™.

Bestellen Sie ein individuelles Konjugat
Sollten Sie in unserem Online-Katalog nicht das Passende finden, erstellen wir Ihnen gern ein Antikörper- oder Proteinkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser Konjugationsservice ist effizient, zuverlässig und nach ISO 9001:2000 zertifiziert.