Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 546 C₅ Maleimide

Beschreibung

Alexa Fluor™ 546 ist ein leuchtend oranger Fluoreszenzfarbstoff, der mit 488 nm- oder 532 nm-Laserlinien erregt werden kann. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 546, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und pH-unempfindlich im Bereich von pH 4 bis 10. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Alexa Fluor™ 546 Farbstoff konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracersubstanzen und Amplifikationssubstraten, die für die Markierung und Detektion von Zellen optimiert wurden an (Weitere Informationen).

Das Maleimid-Derivat von Alexa Fluor™ 546 ist das am häufigsten verwendete Tool zur Konjugation des Farbstoffs an eine Thiol-Gruppe eines Proteins, Oligonukleotid-Thiophosphats oder eines Liganden mit niedrigem Molekulargewicht. Die daraus resultierenden Alexa Fluor™ 546-Konjugate weisen hellere Fluoreszenz- und höhere Lichtbeständigkeit auf als die Konjugate anderer spektral ähnlicher Fluorophore.

Ausführliche Informationen zu diesem Alexa Fluor™ Maleimid:

Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 546 Farbstoff
Reaktive Gruppe: Maleimid
Reaktivität: Thiolgruppen an Proteinen und Liganden, Oligonukleotid-Thiophosphaten
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 554/570 nm
Extinktionskoeffizient: 93.000 cm-1M-1
Farbstoffe mit ähnlichem Spektrum: Rhodamin red, Cy3
Molekulargewicht: 1034,37

Typische Konjugationsreaktion
Das Protein sollte bei einer Konzentration von 50 bis 100 .μM in einem geeigneten Puffer (10 bis 100 mM Phosphat, Tris oder HEPES) bei einem pH-Wert von 7,0 bis 7,5 aufgelöst werden. In diesem pH-Bereich sind die Thiolgruppen des Proteins so nukleophil, dass sie trotz zahlreich vorhandener Proteinamingruppen, die protoniert und relativ unreaktiv sind, fast ausschließlich mit dem Reagenz reagieren. Wir empfehlen, an diesem Punkt jegliche Disulfidbrücken mit einem Reduktionsmittel des 10-fachen molaren Überschusses wie DTT oder TCEP zu reduzieren. Überschüssiges DTT muss durch Dialyse entfernt werden. Anschließend muss eine Thiol-Änderung unter Sauerstoff-freien Bedingungen zur Vermeidung einer Neubildung der Disulfidbrücken durchgeführt werden. Diese Vorsichtsmaßnahmen sind nicht erforderlich, wenn TCEP vor der Maleimid-Konjugation eingesetzt wird.

Alexa Fluor™ Maleimid wird in der Regel unmittelbar vor dem Gebrauch in hochwertigem wasserfreiem Dimethylsulfoxid (DMSO) in einer Konzentration von 1 bis 10 mM gelöst. Stammlösungen müssen so weit wie möglich vor Licht geschützt werden. Im Allgemeinen wird diese Stammlösung der Proteinlösung tropfenweise unter Rühren hinzugefügt, um rund 10 bis 20 Mol Reagenz pro Mol Protein zu erzielen. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur für 2 Stunden oder bei 4 °C über Nacht und vor Licht geschützt erfolgen. Alle unreagierten Thiol-reaktiven Reagenzien können durch Hinzufügen von überschüssigem Glutathion, Mercaptoethanol oder von anderem löslichen niedermolekularen Thiol verbraucht werden.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder Ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Reinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 bis 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 bis 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 bis 100 μg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörpermarkierungskits oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™-Handbuch.

Bestellen’ Sie ein individuelles Konjugat
Sollten Sie’ in unserem Bestandsverzeichnis nicht’ das Passende finden, erstellen wir’ Ihnen gern ein Antikörperkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir verbürgen uns für höchste Qualität. Wir sind nach ISO 9001:2000 zertifiziert.