Invitrogen™ Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅

Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ Beads für die mRNA-Isolierung fangen gezielt mRNA-Moleküle aus nahezu jeder Rohprobe ein. Dies bedeutet, dass keine Aufreinigung von Gesamt-RNA erforderlich ist, wenn mRNA die gewünschte informationstragende Nukleinsäure ist. Da mRNA nur etwa 1 bis 5 % der gesamten RNA in der Zelle ausmacht, stellt eine Isolierung der Gesamt-RNA nicht die effizienteste Option für die Isolierung von mRNA dar. Andere Technologien, die für die Aufreinigung von Gesamt-RNA bestimmt sind, erzielen eine Ausbeute von ∼ 80 % ribosomaler RNA. Das führt dazu, dass mRNA mit ribosomaler RNA, Transfer-RNA, Mikro-RNA, kleiner nukleärer RNA (snRNA) und kleiner zytoplasmatischer RNA (scRNA) um die Membranbindung konkurrieren muss. Vorteile von Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ Beads:

• Schnelles und schonendes Verfahren zur Gewinnung reiner und intakter mRNA
• Isolierung extrem reiner mRNA, die beste Wahl vor der cDNA-Synthese
• Hochempfindliche mRNA-Isolierung ermöglicht die cDNA-Synthese und Erstellung einer cDNA-Bibliothek auch aus kleinsten Ausgangsproben (Erstellung einer cDNA-Bibliothek aus einer einzigen Zelle möglich)

Funktionsweise der Beads
Die Oligo(dT)₂₅-beschichteten Dynabeads™ fangen spezifisch mRNA-Transkriptome aus einer Vielzahl an Rohausgangsproben ein. Ribosomale RNA, DNA, Proteine und kleine RNA-Moleküle (z. B. Transfer RNA, Mikro-RNA und kleine nukleoläre RNA) binden nicht an die Beads und werden entsorgt. Nur polyadenylierte RNA-Spezies (mRNA) werden eingefangen. Die isolierte mRNA liegt in reiner Form vor, sodass nach der Extraktion weder ribosomale RNA entfernt werden muss, noch eine DNase-Behandlung erforderlich ist. Dieses säulenfreie System garantiert die höchste Transkriptom-Wiederfindung:

• Einfangen der mRNA auf mobilen magnetischen Beads
• Schnelle und schonende magnetische Handhabungsverfahren
• Kein mRNA-Verlust bei Zentrifugationen mit hoher g-Zahl
• Keine mRNA während der Elution in Säulenmembranen abgefangen

Anwendungen
mRNA eignet sich für alle molekularen Downstream-Prozesse, insbesondere für Genklonierung, cDNA-Synthese, cDNA-Bibliothekserstellung, RT-PCR, quantitative RT-PCR, RPA (Ribonuklease-Schutzassay), subtraktive Hybridisierung, Primer-Extension, SAGE, RACE und andere. Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ Beads für die mRNA-Isolierung bieten das ideale Verfahren zur Aufreinigung von mRNA vor der Erstellung einer cDNA-Bibliothek. Der Einsatz der Beads gewährleistet höchste Wiederfindung und Anreicherung des Transkriptoms. Das Transkriptom wird mit diesen Beads vollständiger eingefangen als mit Methoden möglich ist, die vor der mRNA-Isolierung eine Isolierung der Gesamt-RNA vorsehen.

Vielseitige Elutionsoptionen
Die Elution kann in jedem beliebigen Volumen bis zu mindestens 5 μl durchgeführt werden. Die mRNA-Elution ist optional, da enzymatische Reaktionen in den Downstream-Verfahren nicht durch Dynabeads gehemmt werden.™ Zusätzlich kann eine cDNA-Synthese direkt auf den Beads durchgeführt werden, um eine wiederverwendbare Festphasen-cDNA-Bibliothek zu erstellen.