Invitrogen™ MICROBExpress™ Bacterial mRNA Enrichment Kit

Das MICROBExpress™ Bacterial mRNA Enrichment Kit ist für die Aufreinigung von bakterieller mRNA durch Entfernen der rRNA aus Gesamt-RNA vorgesehen. Die Reagenzien reichen für 20 mRNA-Aufreinigungen aus jeweils 10 µg Gesamt-RNA. Merkmale des MICROBExpress™ Kits:

• Erhöht drastisch die Empfindlichkeit von Array-Analysen und anderen Verfahren
• Entfernt > 95 % der 16S- und 23S-rRNA aus bakterieller RNA
• Einfaches Verfahren, dauert weniger als 2 Stunden
• Funktioniert mit vielen grampositiven und gramnegativen Bakterien

Schnelle Aufreinigung bakterieller mRNA
Eine Isolierung von mRNA aus Bakterien war bisher praktisch unmöglich. Das MICROBExpress™ Kit nutzt eine neuartige Technologie zur Entfernung von > 95 % der 16S- und 23S-rRNA aus der Gesamt-RNA von E. coli und anderen Bakterienspezies. Das Kit eignet sich für die Aufreinigung von mRNA aus einem breiten Spektrum grampositiver und -negativer Bakterien. Mittels MICROBExpress™ Kit isolierte mRNA ist eine hervorragende Template für die Synthese markierter cDNA für Arrayanalysen und ideal geeignet für quantitative RT-PCR, Northern-Anwendungen und cDNA-Bibliothekerstellung. Die effiziente Entfernung von 16S- und 23S-rRNA aus bakterieller RNA erhöht die Empfindlichkeit bei nachgeschalteten Verfahren erheblich (siehe Abbildung).

Start mit einer beliebigen Gesamt-RNA-Probe
Dieses Host-bakterielle Gesamt-RNA-Gemisch kann mit einer Vielzahl von RNA-Isolierungsmethoden gewonnen werden. Das MICROBExpress™ Kit entfernt spezifisch rRNAs, wobei kleine RNAs (d. h. tRNA und 5S-rRNA) nicht entfernt werden. Die Verwendung von Gesamt-RNA ohne kleine RNAs als Ausgangsmaterial für das MICROBExpress™ Kit ermöglicht die höchste Ebene der mRNA-Anreicherung (siehe Zubehör). Im ersten Schritt des Verfahrens mit dem MICROBExpress™ Kit wird Gesamt-RNA mit einem optimierten Satz Erfassungs-Oligonukleotiden gemischt, die an die bakteriellen 16S- und 23S-rRNAs binden. Danach werden die rRNA-Hybriden mittels derivatisierter magnetischer Mikroperlen aus der Lösung entfernt. Die mRNA bleibt im Überstand und wird durch Ethanolausfällungen zurückgewonnen.

Zubehörprodukte
Für die Verwendung dieses Kits ist ein Magnetständer erforderlich. Diese gibt es in verschiedenen Ausführungen, einschließlich des Single Place Magnetic Stand (Kat.- Nr. AM10026), 6 Tube Magnetic Stand (Kat.- Nr. AM10055) und 96-well Magnetic Stands (Kat.- Nr. AM10027 und AM10050). Das RiboPure™-Bacteria Kit (Kat.- Nr. AM1925) ist ideal für die Aufreinigung von Gesamt-RNA ohne kleine RNAs. Kleine RNAs können mit dem MEGAclear™ Kit aus der Gesamt-RNA entfernt werden (Kat.- Nr. AM1908).