Applied Biosystems™ cAMP-Screen Direct™ Cyclic AMP Immunoassay System

• Verwendet hochempfindliches, chemilumineszentes CSPD™ Substrat mit Saphire-II™ Verstärker, das durch ein Enzymkonjugat aus cAMP ausgelöst wird, das an alkalische Phosphatase gebunden ist (cAMP-AP).
• Die gebrauchsfertige, Chemolumineszenz-Substrat/Enhancer-Formulierung erzeugt eine anhaltende Glimmlichtemission ab 30 Minuten nach der Zugabe
• Wird hauptsächlich für das sekundäre Screening und die präklinische Forschung verwendet, bei der Empfindlichkeit und keine falsch-positiven Ergebnisse erforderlich sind
• Besitzt mit die höchste Empfindlichkeit eines handelsüblichen cAMP-Assays
• Stundenlange Ablesezeit ohne oder mit geringer Verschlechterung des Signals
• Einfaches Protokoll mit Zellen, die direkt auf der Assay-Platte wachsen
• Nützlich für eine Vielzahl von Rezeptoraktivierungsstudien

Hohe Empfindlichkeit und Dauer der anhaltenden Glimmzeit
Dieser Chemolumineszenz-Assay wurde entwickelt, um die höchste Empfindlichkeit eines handelsüblichen cAMP-Assays zu bieten. Es können Mengen von nur 60 Femtomol cAMP nachgewiesen werden. Der Assay verfügt über einen breiten dynamischen Bereich, der 0,06 bis 6.000 Pikomol cAMP erkennt, ohne dass Proben verdünnt werden müssen oder Verfahren wie Acetylierung erforderlich sind. Dies ist besonders bei der Messung der Stimulation und/oder Hemmung von Gs- oder Gi-gekoppelten Agonisten oder Antagonisten in zellbasierten Assays hilfreich. Die Intra-Assay-Präzision bei Doppelproben beträgt in der Regel 5 % oder weniger. Sobald die Substrat-/Verstärkerformulierung das Glimmsignal erreicht hat, kann die Platte stundenlang ohne oder mit nur geringer Verschlechterung des Signals abgelesen werden. Dies ist nützlich bei Untersuchungen, bei denen mehrere Platten miteinander verglichen werden. Darüber hinaus weist der Assay eine außergewöhnlich geringe Kreuzreaktivität mit anderen Adenosin-haltigen oder zyklischen Nukleotiden auf.

Für Rezeptoraktivierungsstudien
Das cAMP-Screen System ist für die Quantifizierung von zellulärem cAMP für funktionelle Assays der Rezeptoraktivierung konzipiert. Der Assay wurde mit gängigen Zelllinien für funktionelle Messungen mit endogenen Rezeptoren, Zelllinien mit exogenisch exprimierten Ligandenrezeptoren auf der Zelloberfläche, Primärzellkulturen und Geweben als Reaktion auf die Behandlung mit den entsprechenden Liganden verwendet. Darüber hinaus wurde es für die Rezeptorcharakterisierung, die Identifizierung des Liganden von Orphan-Rezeptoren und die Charakterisierung neuartiger chimärer Rezeptoren verwendet. Der Assay kann bei Hochdurchsatz-Screenings für Verbindungen verwendet werden, die diese Signaltransduktionswege stimulieren oder stören.

Spezifikationen

• Ziel: Zyklisches AMP
• Assay-Inkubationszeit: 1 h
• Assay-Sensitivität: 60 Femtomol cAMP
• Nachweisverfahren. Chemolumineszenz
• Zur Verwendung mit (Geräte): Mikrotiterplatten-Lesegerät
• Markierung/Farbstoff: Alkalische Phosphatase
• Probentyp: Zelllysate
• Probenvolumen: 60 μl
• Lagerung: Bei 2 °C bis 8 °C lagern.