Invitrogen™ CellEvent™ Senescence Green Detection Kit

Diese fluorescein-basierte Sonde enthält zwei Galactosidgesellschaften, wodurch sie ein Ziel für β-Galactosidase ist. Die Aktivierung der β-Galactosidase wird häufig als Biomarker für alternde Zellen verwendet. Dieses Hydrolase-Enzym befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen zu Monosaccharide um. Das enzymatisch gespaltene Produkt bleibt aufgrund der kovalenten Bindung von intrazellulären Proteinen in der Zelle erhalten und sendet ein fluorogenes Signal mit Absorptions-/Emissionsmaxima von 490/514 nm aus.

Zu den Leistungsmerkmalen des Kits zählen:
• Zuverlässige und schnelle Fluoreszenzdetektion von seneszierenden Zellen
• Höhere Empfindlichkeit Im Vergleich zum herkömmlichen kolorimetrischen x-gal
• Fluoreszenzsignal bleibt gut erhalten und kann mit den standardmäßigen Alexa Fluor™ 488/FITC-Filtersätzen nachgewiesen werden
• Multiplex-fähig—die fluoreszente Seneszenzsonde ist Multiplex-fähig

Aufgrund einer begrenzten replikativen Lebensdauer treten normale Zellen in den Zellzyklusstopp ein, auch Zellseneszenz genannt. In dieser seneszierenden Phase bleiben die Zellen stoffwechselaktiv, ohne den Zelltod oder die Zellteilung zu durchlaufen. Sie nehmen ein spezifisches Phänotyp an, das das Aussehen mehrerer Kerne, die erhöhte Vakuolisierung, die Expression von pH-abhängiger β-Galactosidase und die morphologische Vergrößerung und Erweiterung umfasst. Seneszenz kann durch eine Vielzahl von Mechanismen eine Rolle bei der Tumorunterdrückung, dem Tumorwachstum, dem Altern und der Gewebereparatur spielen.

Die Aktivierung der β-Galactosidase wird häufig als Biomarker für alternde Zellen verwendet. Dieses Hydrolase-Enzym befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen zu Monosaccharide um. Die Aktivität ist bei lysosomalem pH -Wert 4 optimal, herkömmliche Assays messen jedoch bei pH 6. Es hat sich gezeigt, dass die normalisierte β-Galactosidase-Aktivität in seneszierenden Zellen doppelt so hoch ist wie in pre-seneszierenden Zellen, unabhängig vom pH-Wert, der für die Prüfung verwendet wird.

Ein kolorimetrisches Substrat für β-Galactosidase, 5-Bromo-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (x-gal) wird seit langem zur Erkennung metabolischer Aktivität in Zellen in vitro verwendet. Die Verwendung ist jedoch aufgrund eines inkonsistenten Signals, der Länge des Assays und der Unfähigkeit, eine Multiplexverbindung herzustellen, beschränkt.

Deshalb haben wir ein empfindliches, fluoreszierendes Substrat für β-Galaktosidase entwickelt, das für den Nachweis alternder Zellen verwendet werden kann. Die CellEvent™ Senescence Green Sonde ist ein fluorescein-basiertes Reagenz, das zwei Galactosidgesellschaften enthält und somit ein spezifisches Ziel von β-Galactosidase ist. Das enzymatisch gespaltene Produkt bleibt aufgrund der kovalenten Bindung von intrazellulären Proteinen in der Zelle erhalten und sendet ein fluorogenes Signal mit Absorptions-/Emissionsmaxima von 490/514 nm aus.

Das CellEvent™ Senescent Green Kit bietet eine CellEvent™ Senescent Green Sonde und einen optimierten Puffer für die Detektion von seneszierenden Zellen in festen Proben. Diese Sonde kann mit anderen fluoreszierenden Reagenzien, die mit der Paraformaldehydfixierung kompatibel sind, per Multiplexing verbunden werden.