Thermo Scientific™ CloneJET™ PCR-Klonierungs-Kit mit kompetenten DH10B-Zellen

• Dieses Paket enthält die CloneJET PCR-Klonierungskit (20 oder 40 Reaktionen) und DH10B Kompetente Zellen, die für die Verwendung mit dem Kit optimiert sind und mit dem Ligationsprodukt direkt transformiert werden können

CloneJET PCR-Klonierungskit
Ein fortgeschrittenes Positivauswahlsystem für die hochwirksame Klonierung von PCR-Produkten, die mit einer beliebigen thermostabilen DNA-Polymerase erzeugt werden. Beliebige DNA-Fragmente mit glatten (Blunt End) oder überhängenden Enden (Sticky-End) können kloniert werden. Das Kit eignet sich sowohl für phosphorylierte als auch nicht-phosphorylierte DNA-Fragmente. Die Ligation in den beiliegenden Vektor zur Positivselektion dauert nur fünf Minuten und führt zu einer Ausbeute von über 99 % rekombinanter Klone. Die mit einem Proofreading-Enzym hergestellten PCR-Produkte mit glattem („blunt“) Ende werden direkt in den Klonierungsvektor ligiert.

PCR-Produkte, die mit Non-Proofreading-DNA-Polymerasen (z. B. Taq-Polymerase) oder DNA Polymerase-Mischungen hergestellt wurden, werden vor der Ligation fünf Minuten lang mit dem im Kit enthaltenen Blunting-Enzym inkubiert. DH10B Kompetente Zellen sind für die Verwendung mit diesem Kit optimiert und können direkt mit dem Ligationsprodukt transformiert werden.

Enthält den neuartigen, gebrauchsfertigen positiven Selektionsklonierungsvektor pJET1.2/blunt. Der Vektor enthält ein letales Restriktionsenzymgen, das durch Ligation eines DNA-Inserts in die Klonierungsstelle unterbrochen wird. Dementsprechend können nur Bakterienzellen mit rekombinanten Plasmiden Kolonien bilden. pJET1.2/blunt-Vektormoleküle nach Ringschluss, die kein Insert vorweisen, exprimieren ein letales Restriktionsenzym, wodurch die E. coli-Wirtszelle nach der Transformation abgetötet wird. Diese Positiv-Selektion beschleunigt drastisch das Kolonie-Screening und vermeidet zusätzliche Kosten für die Blau-Weiß-Selektion.

• Schnell: PCR-Klonierung in nur 5 min
• Höchste Effizienz – 99 % positive Klone
• Kein Klonierungshintergrund: Positiver Selektionsvektor
• Vielseitig: Ideal für die Klonierung mit stumpfem oder überhängendem Ende
• Wirtschaftlich: Kein kostenintensives Blau-Weiß-Screening

Die Anwendungen umfassen:

• Klonierung von PCR-Produkten bis zu 10 kb mit glattem Ende oder 3'-dA-Schwanz
• Klonierung von DNA-Fragmenten, die mit Restriktionsenzymen erzeugt wurden
• Sequenzierung von klonierter DNA
• In vitro- und In vivo-Transkription der klonierten Inserts des T7 Promotors

DH10B Kompetente Zellen
Hochwirksame, chemisch kompetente E. Coli-Zellen. Die DH10B zum Klonen von DNA, die Methylcytosin und Methyladenin enthält, geeignet ist, sodass sowohl prokaryotische als auch eukaryotische genomische DNA effizient kloniert werden können. Diese Zellen eignen sich ideal für den Aufbau von cDNA-Bibliotheken mit aus Plasmiden abgeleiteten Vektoren. Genotyp: F – mcrAΔ (mrr-hsdRMS-mcrBC)φ 80lakZΔ M15Δ lakX74 rekA1 endA1 araD139Δ (Ara-leu)7697 gilU gatKλ – rpsL(StrR)nupG.

• Hohe Transformationseffizienz: > 1 x 109 KbE/μg pUC19-DNA
• Geeignet für Routine- und Hochdurchsatz-Klonanwendungen
• Praktische zwei Reaktionen pro Fläschchenverpackung
• S.O.C. Auch das Wachstumsmedium ist enthalten