Invitrogen™ Dynabeads™ mRNA DIRECT™ Reinigungskit

Das Dynabeads® mRNA DIRECT™ Kit dient für die einfache und schnelle Trennung reiner, intakter polyadenylierter (polyA) mRNA direkt aus dem Rohlysat tierischer und pflanzlicher Zellen und Gewebe. Die isolierte mRNA eignet sich für alle Folgeanwendungen. Vorteile des Dynabeads® mRNA DIRECT™ Kits:

• Schnelles—15-minütiges Verfahren liefert reine, intakte mRNA
• Hochreine mRNA-Isolatio—nbeste Wahl vor der cDNA-Synthese
• Sensitive mRNA-Isolatio—ermöglicht die cDNA-Synthese und die cDNA-Bibliothekskonstruktion aus ultrakleinen Startproben (ermöglicht den Aufbau einer cDNA-Bibliothek aus einer einzelnen Zelle)

Systemübersicht
Das Isolationsprotokoll basiert auf der Basispaarung zwischen den PolyA-Rückständen am 3'-Ende der meisten mRNA und den Oligo (dT)₂₅ Rückständen, die kovalent an die Oberfläche der Dynabeads® gekoppelt sind. Andere RNA-Arten ohne polyA-Schwanz hybridisieren nicht an den Perlen und werden problemlos ausgewaschen. Ribosomale RNA, DNA, Proteine und kleine RNA-Moleküle (z. B. Transfer RNA, Mikro-RNA und kleine nukleoläre RNA) binden nicht an die Beads und werden verworfen. RNase-Hemmstoffe im Lyse-/Anbindungs-Puffer zusammen mit strengen Hybridisierungs- und Waschbedingungen gewährleisten die Trennung reiner, intakter mRNA aus RNase-reichen Rohproben ohne Verwendung stark chaotropischer Wirkstoffe. Die mRNA-Aufreinigungs-Beads erfassen spezifisch mRNA-Transkriptome aus einer Vielzahl an Rohausgangsproben (siehe Protokoll). 1 mg Dynabeads® Oligo (dT)₂₅-Perlen (200 μl) bindet bis zu 2 μg mRNA. Eine typische Säugetierzelle enthält etwa 10–30 pg Gesamt-RNA; davon sind 1–5 % mRNA.