Invitrogen™ Dynabeads™ M-280 Tosyl-aktiviert

Wenn Sie Antikörper, Peptide, intakte Proteine und funktionale Enzyme kovalent an die Oberfläche von Magnet-Beads koppeln möchten, dann entscheiden Sie sich für tosylaktivierte Dynabeads®. Die optimale Antikörperausrichtung macht diese Beads zur ausgezeichneten Wahl für die Immunpräzipitation von Proteinen und Proteinkomplexen.

Ideal für die Immunpräzipitation von Proteinkomplexen:
Der niedrige Hintergrund und die kovalente Bindung von Antikörpern an der Bead-Oberfläche machen tosylaktivierte Dynabeads zu einer hervorragenden Wahl für die Immunpräzipitation von Proteinen und Proteinkomplexen (Co-Immunpräzipitation, Co-IP). Durch die sanfte und schnelle magnetische Konzentration der Beads sowie durch ihre kurzen Inkubationszeiten (möglich durch eine schnelle oberflächenbasierte Bindungskinetik) eignen sich Tosyl-aktivierte Dynabeads hervorragend für die Immunpräzipitation von hochlabilen oder und/oder transienten (kurzlebigen) Proteinkomplexen.

Ultraschnelle Protokolle:

• Identifizieren der Bestandteile von Proteinkomplexen in Minuten anstatt in Stunden
• Die zeitliche Auflösung ist kurz genug, um transiente und labile Komplexe zu identifizieren
• Identifizieren von Bindungspartnern, die mit längeren Protokollen nicht identifiziert werden können
• Schnelle Protokolle reduzieren die ohnehin schon extrem geringe Hintergrundbindung noch weiter
• Höheres Signal-Rausch-Verhältnis

Anwendungen:
• IP von Proteinen und Proteinkomplexen
• Kopplung von funktionellen Enzymen an die Bead-Oberfläche für nachfolgende Assays
• Kopplung von Peptiden an die Bead-Oberfläche zur Identifizierung gebundener Moleküle

Reinigen von Peptiden, Proteinen und Enzymen, für die Folgendes gilt:
• Vorübergehend stabil
• Strukturell intakt
• Temperaturlabil
• In ihrer nativen Konformation und funktionell

Überblick über das Kopplungsverfahren:
die kovalente Bindung erfolgt über Nacht durch Inkubation des gewünschten Liganden mit den tosylaktivierten Dynabeads. Zu den häufig an tosylaktivierten Dynabeads gekoppelten Liganden gehören Peptide und Proteine (z. B. Antikörper für Immunpräzipitation oder Co-Immunpräzipitation). Die Kopplung erfolgt bei neutralem bis hohem pH-Wert und bei 37 °C. Wir empfehlen die Kopplung bei pH 8,5 bis 9,5, bei pH-labilen Liganden; die Kopplung kann in einem alternativen Puffer bei pH 7,4 erfolgen.

Nach Abschluss des Liganden-Kopplungsschritts wird die eigentliche Oberflächenbeschichtung der Tosyl-aktivierten Dynabeads inertisiert, was zu einer geringen unspezifischen Bindung führt.

Info zu Dynabeads:
Dynabeads sind nicht-poröse, monodisperse, superparamagnetische Mikrokugeln. Sie sind in Lösung äußerst mobil, sodass an die Beads gebundene Liganden kontinuierlich mit dem gesamten Probenvolumen interagieren können. Die superparamagnetischen Beads werden an die Röhrchenwände gezogen, wenn das Röhrchen auf ein Gestell mit einem starken Magnetfeld platziert wird (rote Navigationsleiste: Brands > Dynal® > Magnets (Marken > Dynal® > Magnete)). Starke Magnetfelder ziehen die Beads umgehend an die Röhrchenwand, sodass der Überstand leicht und vollständig mit der Pipette entfernt werden kann. Waschschritte werden auf ähnliche Weise durchgeführt.

Merkmale der Bead-Oberfläche bei tosylaktivierten Dynabeads:
• p-Toluolsulfonyl (Tosyl)-Gruppen
• Hydrophob, pH-neutral
• Kovalente Bindung durch primäres Amin (NH₂) oder Sulfhydryl (SH)-Gruppen

Bindungskapazität pro Milligramm Beads:
Variiert je nach Ligand (z. B. 5 – 10 µg IgG)