Ambion™ ERCC RNA-Spike-In-Gemisch

Variation der RNA-Expressionsdaten können auf verschiedene Faktoren zurückgeführt werden, einschließlich die Qualität des Ausgangsmaterials, das Niveau der Zellstruktur und RNA-Ertrags, die angewendete Plattform und die Person, die das Experiment durchführt. Um diese Variabilitätsquellen zu kontrollieren, wurde vom External RNA Controls Consortium (ERCC), einer Ad-hoc-Gruppe aus akademischen, privaten und öffentlichen Organisationen, die vom National Institute of Standards and Technology betreut wird, ein gemeinsamer Satz externer RNA-Kontrollen entwickelt (NIST ). Diese Kontrollen umfassen einen Satz unmarkierter polyadenylierter Transkripte, die einem RNA-Analyse-Experiment nach der Probenisolierung hinzugefügt werden, um Messungen gemäß definierten Leistungskriterien durchzuführen. Bis zur Einführung solcher generell akzeptierten Kontrollen war es schwierig, eine gründliche Untersuchung der fundamentalen analytischen Leistungsmetrik durchzuführen. Von der zuverlässigen Marke für Qualitäts-RNA-Reagenzien Ambion™ ERCC Spike-In Control Mischungen sind kommerziell erhältliche, vorformulierte Mischungen aus 92 Transkripten, die von NIST-zertifizierten DNA-Plasmiden abgeleitet und von diesen rückverfolgbar sind. Die Transkripte sind auf eine Länge von 250 bis 2.000 NT ausgelegt, was natürlichen eukaryotischen mRNAs nachempfunden ist.

Hauptproduktmerkmale:

Erreichen eines Standardmaßes für den Datenvergleich zwischen Genexpressionsexperimenten

Messung der Empfindlichkeit (untere Nachweisgrenze) und des Dynamikbereichs eines Experiments

Quantifizierung der differentiellen Genexpression

Erschließen Sie das Potenzial der RNA-Analyse
Die RNA-Analyse, einschließlich Genexpressionsprofilen und der Vermessung des gesamten Transkriptoms, kann zu einem besseren Verständnis von Expressionsmustern bei Krankheitszuständen führen und liefert bessere Einblicke in biologische Signalwege und molekulare Mechanismen, die das Zellschicksal, die Entwicklung und das Fortschreiten der Zelle regulieren. Die traditionellen Methoden für RNA-Analysen, wie z. B. qRT-PCR und Microarrays, haben sich bewährt, werden nun jedoch durch die nächste Generation der Sequenzierung, eine digitale Alternative mit hohem Durchsatz, ersetzt. Da jede Methode mehrere Plattformen umfasst und der Bedarf nach Vergleichen verschiedener Proben auf Plattformen in der ganzen Welt besteht, ist ein Standardmaß für Datenvergleiche erforderlich geworden. Da die Möglichkeiten der RNA-Analyse erweitert werden, wird die Notwendigkeit, eine standardisierte Ansicht der Daten zu erstellen, noch wichtiger.

Erzielen und Vergleich von Ergebnissen mit bestätigter Genauigkeit
Ambion™ ERCC RNA-Spike-In-Kontrollen werden verwendet, um eine standardmäßige RNA-Baseline-Messung sowohl innerhalb eines Experiments als auch über mehrere Experimente hinweg, die mit verschiedenen Proben und Plattformen durchgeführt werden, zu erstellen. Mit zwei Spike-in-Gemischen (Abbildung 1) können verschiedene Messungen, wie z. B. die Empfindlichkeit und der dynamische Bereich, zur Bewertung verschiedener Parameter in einem Experiment oder bei mehreren Experimenten geprüft werden (Abbildung 2). Darüber hinaus können mit einem hohen Maß an Verlässlichkeit mittels hochkonkordanter Beziehung zwischen ExFold RNA Spike-In 1 und ExFold RNA Spike-In 2 Faltungsänderungs-Verhältnisse zwischen zwei Proben berechnet werden (Abbildung 3). Die Messungen werden anhand bekannter molarer Konzentrationen für jedes Transkript in einem Spike-in-Gemisch und durch Kombination der Verhältnisse von 4 unterschiedlichen Untergruppen der 92 Transkripte bestimmt. Die Kontrollen sind ideal für Sequenzierungsexperimente der nächsten Generation, wie z. B SOLiD™ System und unterstützte Microarary-Plattformen wie das Illumina™ Sentrix™ BEAD-Chip

Wählen Sie zwischen flexiblen Optionen für ERCC-Kit-Konfigurationen
Ob Messung des dynamischen Bereichs oder der Änderung der Genexpressionsfalte, Ambion™ Die ERCC-Spike-In-Kontrollmischungen sind in zwei Kit-Varianten erhältlich, um Ihren experimentellen Anforderungen gerecht zu werden. Verwenden Sie ERCC Spike-In Mix, um den dynamischen Bereich und das untere Detektionslimit Ihrer Plattform zu bestimmen, und verwenden Sie ERCC ExFold Spike-In Gemische zur Beurteilung der Genauigkeit differentieller Genexpressionsmessungen.

	ERCC RNA-Spike-In-Mischung 1*	ExFold Spike-In Mischung 1*	ExFold Spike-In Mischung 2*	Nuklease-freies Wasser
ERCC RNA-Spike-In-Mix (Kat.-Nr. 4456740)	10 μL	—	—	1,75 ml
ERCC ExFold RNA-Spike-In-Mixes (Kat.-Nr. 4456739)	—	10 μL	10 μL	1,75 ml

*Obwohl ERCC RNA-Spike-In-Mix 1 und ExFold-Spike-In-Mix 1 die gleiche Formulierung von ERCC-Transkripten enthalten, darf für die Beurteilung bei Fachwechseln nicht der ERCC-RNA-Spike-In-Mix 1 durch den ERCC-RNA-Spike-In-Mix 1 ersetzt werden. Verwenden Sie nur ExFold Spike-In Mischung 1 und Mischung 2 mit derselben Herstellungschargennummer.

Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.