Thermo Scientific™ EZ-Link™ Maleimide-PEG Solid-Phase Biotinylation Kit - Mini-Spin Columns

Dieses innovative Antikörper-Markierungssystem nutzt nickelchelatierte Agarose, um Antikörpermoleküle vorübergehend über ihre Histidin-reichen Fc-Regionen zu immobilisieren. Sobald der Antikörper auf dem Harz fixiert ist, lässt er sich in der Gelenkregion langsam reduzieren, sodass er freie Sulfhydryle erzeugen kann, die dann mit dem Maleimid-PEG2-Biotin-Reagenz biotinyliert werden. Überschüssiges Markierungsreagenz und Nebenprodukte werden anschließend abgewaschen, bevor der markierte und gereinigte Antikörper mit einer milden Imidazol-Lösung aus dem Harz zurückgewonnen wird. Es ist keine Gelfiltration oder Dialyse erforderlich. Kits für kleine Reaktionen (0,1 bis 1 mg Antikörper) und größere Maßstäbe (1 bis 10 mg Antikörper) werden angeboten.

Leistungsmerkmale: 

Schnelle Markierung und Reinigung – Das gesamte Verfahren dauert nur etwa 2 Stunden

Einfaches Entfernen von verbrauchtem und überschüssigem Markierungsreagenz – Nebenprodukte der Reaktion werden einfach abgewaschen – keine Dialyse oder Gelfiltration erforderlich

Keine Verdünnungseffekte – Die Festphasenmethode ermöglicht das Wiedergewinnen zunächst verdünnter Antikörper in kleinerem Volumen nach der Markierung

Optimierte Protokolle – Spezifische Protokolle für Antikörper sorgen für eine behutsame Disulfid-Reduktion und eine angemessene Markierung, um die Möglichkeit einer Inaktivierung zu minimieren

Leistungsstarkes Biotin-Reagenz – Malemid-PEG2-Biotin nutzt eine wirksame, Sulfhydryl-spezifische Maleimid-Chemie und umfasst einen hydrophilen Polyethylenglycol(PEG)-Spacer, der die langfristige Löslichkeit markierter Antikörper stabilisiert

Acht Biotin-Markierungsexperimente pro Kit – Die Thermo Scientific No-Weigh Packung stellt sicher, dass das Biotin-Reagenz für acht separate Experimente vollständig aktiv ist

Produktspezifische Informationen:

EZ-Link Festphasen-Biotinylierungskits nutzen eine innovative Strategie für die Antikörperbiotinylierung, die den Prozess in vielerlei Hinsicht vereinfacht und eine erfolgreiche Biotinylierung für Anfänger und Experten gleichermaßen ermöglicht. Der Ansatz umfasst die Immobilisierung des Antikörpers auf einem Metallchelat bildenden Affinitätsträger und die Durchführung der Biotinylierung in der Festphase. Antikörper binden sich hauptsächlich durch die Histidin-reiche Fc-Region von Antikörpern der IgG-Klasse leicht an Metallchelat bildende Träger wie Nickel oder Kobalt. Diese Funktion ermöglicht die einfache Durchführung der Derivatisierungschemie, während der Antikörper an den Träger gebunden ist. Diese Strategie erleichtert die Reagenzienabgabe und das Entfernen verbrauchter Reagenz. Der resultierende modifizierte Antikörper wird dann durch Elution mit einer gepufferten Imidazol-Lösung selektiv aus dem Träger entfernt. Der Festphasenansatz zur Antikörperbiotinylierung bietet mehr Kontrolle über die Reaktion. Beispiel: Das Reagenz- und Antikörperverhältnis sowie die Reaktionszeiten lassen sich anpassen, um den für die vorgesehene Anwendung geeigneten Biotinylierungsgrad zu erreichen. Die Kits enthalten ein wässriges, lösliches Sulfhydrylgruppen-spezifisches Reagenz (Maleimid-PEG2-Biotin), das auf zugängliche Sulfhydrylgruppen (-SH) auf der Antikörperoberfläche abzielt. Das Format lässt sich auf der Konzentrationsebene von mehreren Milligramm Antikörper im 1 ml-Säulenkit (Art.-Nr. 21920) oder mit dem Mini-Spin-Säulenkit (Art.-Nr. 21930) für Biotinylierungen bei Antikörperkonzentrationen im niedrigen Mikrogrammbereich anwenden.