Invitrogen™ GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Enzyme Mix

GeneArt™ Enzymgemisch für die nahtlose Klonierung und Assemblierung ermöglicht die simultane und direktionale Klonierung von 1 bis 4 PCR-Fragmenten, bestehend aus einer beliebigen Sequenz, in einen beliebigen linearisierten Vektor, in einer 30-minütigen Reaktion bei Raumtemperatur. GeneArt™ Enzymgemisch für die nahtlose Klonierung und Assemblierung ist die kostengünstige Wahl für die Kreation von Konstrukten bis zu 13 kb mit der Option der High-Throughput-Assemblierung.

• Effizienz: Möglichkeit der Vor-Klonierung großer Fragmente für erhöhte Klonierungs-Effizienz
• Schnell und einfach: Klonieren Sie DNA-Fragmente mit Sequenzen Ihrer Wahl in einem einzigen Vektor (bis zu 13 kb); keine Stellen für Restriktionsverdau, Ligation oder Rekombination erforderlich
• Kostenlose Tools: Erstellen Sie Ihre endgültigen Konstrukte und DNA-Oligos in silico mit Hilfe unseres kostenlosen webbasierten Tools, das Sie Schritt für Schritt durch Ihr Projekt führt
• Vektor-Flexibilität: Verwenden Sie unseren linearen Vektor oder einen Vektor Ihrer Wahl

Für das Klonieren von bereits vorhandenen DNA-Elementen, die zu lang sind, um durch PCR amplifiziert zu werden, und für Endmoleküle bis zu 40 kb ziehen Sie das GeneArt™ PLUS Kit für nahtlose Klonierung und Assemblierung (nur 1 – 4 DNA-Fragmente) in Betracht. Für Endmoleküle, die größer als 110 kb sind, erwägen Sie bitte das GeneArt™ High-Order Genetic Assembly System.

Einfache und schnelle Klonerstellung
GeneArt™ nahtlose Klonierung ist ein einfacher Prozess in zwei Schritten, der aus In-vitro-Assemblierung und anschließender Transformation besteht. Das Enzymgemisch enthält ein proprietäres Enzym-Puffer-Gemisch zur Verbindung der DNA-Fragmente ohne zusätzliche Sequenzen oder Narben (“nahtlos”). Die Endhomologie lässt sich einfach durch PCR-Amplifikation mit individuellen DNA-Oligos integrieren, die mit unserem kostenlosen Webtool entwickelt wurden.

Effizienz, Flexibilität und Präzision bei der Klonierung
Der Erfolg der Klonierung ist unabhängig von Insertsequenz und Vektortyp. Sie können also nahezu jede gewünschte Sequenz oder Sequenzkombination erstellen und einem Plasmid hinzufügen, solange es entweder durch Restriktionsenzymverdau oder PCR linearisiert werden kann. Die durch die Reaktion erhaltenen zirkulierten Klone enthalten nur die Sequenz Ihres ursprünglichen Vektors, Inserts und designierte Homologien ohne überflüssige Nucleotid-Einfügungen.

In silico Klonierungs-Design-Support
Ein wichtiger Schritt bei GeneArt™ nahtloser Klonierung ist das richtige Design von Fragmenten und Oligos mit der entsprechenden Homologie und dem passenden Abstand, um eine erfolgreiche Assemblierung Ihres Klons zu gewährleisten. Zur Vereinfachung und Beschleunigung des Designprozesses bieten wir ein kostenloses Online-Hilfsmittel, das GeneArt™ Design Tool für nahtlose oder High-Order Assemblierung und Mutagenese, mit dem Sie Ihr Experiment per Computersimulation in silico gestalten können. Das Tool führt den Benutzer durch die Konstruktentwicklung, einschließlich Fragmentimport sowie Bestimmung von Reihenfolge und Ausrichtung. Es prüft Bereiche der Homologie und potenzielle Designprobleme, erstellt ggf. Primer für die Vorklonierung oder Integration der Endhomologie zwischen Fragmenten und generiert endgültige Kartendateien des Konstrukts und Sequenzen im Genbank-Format zum Herunterladen oder Importieren in die Vector NTI™ -Software.

Anwendungen
Das GeneArt™ Enzymgemisch für die nahtlose Klonierung und Assemblierung wurde entwickelt, um Klonierung und DNA-Assemblierung in einer Vielzahl von Anwendungen in der Molekularbiologie und synthetischen Biologie zu ermöglichen. Das Produkt ermöglicht die Erstellung von modularen Expressionsvektoren mit austauschbaren Teilen und kann für die Ausführung einer Vielzahl verschiedener Aufgaben verwendet werden, die sonst mehrere Schritte umfassen. Das Gemisch eignet sich für die Kreation von Fusionsproteinen, Entfernung, Austausch oder Hinzufügen von DNA-Elementen wie Restriktionsstellen in einem vorhandenen Vektor sowie für die Ausführung vieler anderer Verfahren, die eine Manipulation der genetischen Sequenzen erfordern.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen und Tieren vorgesehen.