Invitrogen™ GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis PLUS System

Merkmale:

• Leistungsstark— Austauschen, Entfernen und Einfügen von bis zu 3 Nukleotiden an 1, 2 oder 3 separaten Positionen in DNA-Plasmiden mit bis zu 14 kb
• Flexibel— Zielgerichtete Mutagenese an mehreren Positionen mit degenerierten Nukleotiden sowie gezielte Mutationen an Einzelpositionen mit einer Länge von bis zu 25 Nukleotiden oder bei degenerierten Nukleotiden von 12 Nukleotiden
• Effizient— Erzielen Sie gleich beim ersten Versuch die gewünschten Mutanten; über 90 % richtige Mutanten in einem Plasmid mit 10 kb
• Schnell— Mutierte Plasmid-DNA ist in der Regel in weniger als 3 Stunden erhältlich, mit einfachem Protokoll und minimalem Arbeitsaufwand.
• Vielseitig— Verwenden Sie Plasmide unterschiedlicher Größe sowie isolierte DNA aus jeder beliebigen Quelle; keine speziellen Vektoren, Wirtsstämme oder Restriktionsstellen erforderlich

Optimiertes Mutageneseprotokoll
Das GeneArt™ ortsgerichtete Mutagenesesystem wurde im Hinblick auf Effizienz und Funktionalität an mehreren Stellen optimiert. Diese Neuerungen sind in dem neuen “PLUS”-Kit enthalten. Wie schon in der ersten Generation des GeneArt™ ortsspezifischen Mutagenesesystems werden DNA-Methylierung und Amplifikation in einer einzigen Reaktion kombiniert, so dass die Notwendigkeit eines in-vitro DpnI-Verdaus entfällt. Nach Methylierung und Amplifikation wird in einer 15-minütigen In-vitro-Rekombinationsreaktion der amplifizierten PCR-Produkte der Kolonien-Output um das 3- bis 10-fache erhöht und die Effizienz der Mutagenese gesteigert. Bei einer endgültigen Transformation der mutierten DNA in DH5α™ E. coli-Zellen wird die methylierte parentale DNA komplett verdaut, sodass nur das intakte unmethylierte Reaktionsprodukt der Mutagenese zurückbleibt. Keine Reinigungsschritte oder zusätzlichen Aufschlüsselungen nötig. Einzelne Kolonien können am folgenden Tag verwendet werden, um Mutationen zu überprüfen.

Einfache Gewinnung gewünschter Mutanten
Die Erstellung von Mutanten mit dem GeneArt™ ortsgerichteten Mutagenesesystem stützt sich auf die inhärenten Eigenschaften von DNA-Methylase, High-Fidelity DNA-Polymerase, von Rekombinationsenzymen und der nativen McrBC-Endonuklease von E. coli. Integrieren Sie Ihre gewünschte(n) Mutation(en) in den Primer, und verwenden Sie dazu unser GeneArt™ Design Tool für die nahtlose Mutagenese und Assemblierung (siehe untenstehenden “in silico Design-Support”). Kombinieren Sie die Vektor- und Mutagenese-Primer, damit Sie nach PCR, Rekombination und Transformation mit über 90 % Effizienz nur Vektoren mit den gewünschten Mutationen erzielen.

In silico Design Support
Ein wichtiger Schritt in der GeneArt™ ortsgerichteten Mutagenese ist das richtige Design von Primern mit der passenden Homologie und dem passenden Abstand, um eine erfolgreiche Mutagenese Ihres Plasmids zu gewährleisten. Zur Vereinfachung und Beschleunigung des Designprozesses bieten wir ein kostenloses Online-Tool, das GeneArt™ Design Tool für die nahtlose oder High-Order-Assemblierung und Mutagenese, mit dem Sie Ihr Experiment per Computersimulation gestalten können. Das Tool ermöglicht Ihnen die Überprüfung Ihrer Plasmidsequenz und die Gestaltung von DNA-Oligos zur Einbringung der gewünschten Mutationen. Es bietet eine aktualisierte Aminosäuresequenz für Ihr mutiertes Gen, zeigt eine graphische Darstellung des neuen Konstrukts und ermöglicht das Herunterladen einer kommentierten Sequenz im GenBank-Format, das mit der Vector NTI™ Software kompatibel ist.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen und Tieren vorgesehen.