Invitrogen™ Glutathione Colorimetric Detection Kit

Das Glutathion-Nachweiskit, das nur für Forschungszwecke verwendet wird, ist ein kolorimetrischer Assay, der für die Quantifizierung und den Nachweis von Glutathion in Vollblut, Serum, Plasma, Erythrozyten, Urin, Zelllysaten und Gewebeproben entwickelt wurde.

Dieses vollständige, gebrauchsfertige Kit enthält durchsichtige 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Glutathion-Standard, Assaypuffer und andere Komponenten zur Durchführung des Assays. Zur Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das eine optische Absorption bei 405 bis 412 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: kolorimetrisches Nachweiskit
• Probentypen: Vollblut, Serum, Plasma, Erythrozyten, Urin, Zelllysate und Gewebeproben
• Empfindlichkeit: 0,634 μM
• Standardkurvenbereich: 0,78 – 25 μM
• Reaktivität: artunabhängig

Hintergrund
Glutathion (GSH) ist das in Säugetierzellen höchstkonzentrierte Nicht-Protein-Thiol und liegt in Konzentrationen von 0,5 – 10 mM vor. GSH spielt eine Schlüsselrolle in vielen biologischen Prozessen, einschließlich der Synthese von Proteinen und DNA, dem Transport von Aminosäuren und dem Oxidationsschutz von Zellen. Schädliche Wasserstoffperoxid-Zellkonzentrationen werden durch das Enzym Glutathion-Peroxidase (GP) mithilfe von GSH als Reduktionsmittel minimiert. Der oxidierte GSH-Dimer, bezeichnet als GSSG, wird durch die GP-Reaktion aus GSH und Peroxid gebildet. Eine wichtige Rolle von GSSG in der NFkB-aktivierenden Signalkaskade wird durch die Tatsachen suggeriert, dass der potente NFk B-Induktor, das Tetradecanoylphorbolacetat, intrazelluläre GSSG-Spiegel und GSSG/GSH-Verhältnisse erhöht. Glutathion-S-Transferasen (GST) sind eine wichtige Gruppe von Enzymen, die die nukleophile Zugabe von GSH zu Elektrophilen katalysieren. Sie werden von 5 Genfamilien kodiert; 4 davon kodieren zytosolisches GST und eine kodiert die mikrosomale Form von GST.

Assay-Prinzip
Das kolorimetrische Glutathion-Nachweiskit wurde zur quantitativen Messung von Glutathion (GSH) und oxidiertem Glutathion (GSSG), das in einer Vielzahl von Proben enthalten ist, entwickelt. Eine Trennung oder ein Waschen sind nicht erforderlich. Zur Erzeugung einer Standardkurve für den Assay wird ein GSSG-Standard bereitgestellt und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Das Kit verwendet ein kolorimetrisches Substrat, das mit der freien Thiolgruppe auf GSH reagiert, um ein stark gefärbtes Produkt zu erhalten. Die mitgelieferten Reagenzien liegen in Lösung vor und erfordern eine einfache Verdünnung, um im Assay verwendet werden zu können. Durch Verwendung von 2-Vinylpyridin (nicht im Lieferumfang enthalten) zum Blockieren von freiem GSH in der Probe kann oxidiertes Glutathion (GSSG) bestimmt werden. Alle Proben, die nicht mit 2-Vinylpyridin behandelt wurden, ergeben Gesamt-GSH-Konzentrationen. Die Konzentration an freiem GSH in der Probe wird aus der Differenz zwischen dem insgesamt bestimmten GSH und dem aus oxidiertem Glutathion erzeugten GSH für die mit 2-Vinylpyridin behandelten Proben berechnet. Die Konzentration des GSH kann entweder als Endpunktwert der bei 405 nm entwickelten Farbe oder durch Messung der Rate der Farbentwicklung bei 405 nm bestimmt werden.