IBA Lifesciences Gravity Flow Strep-Tactin Sepharose 4FF

Das Strep-Tag™ Aufreinigungssystem basiert auf der hoch selektiven und leicht kontrollierbaren Interaktion zwischen dem Strep-tag™II Peptid und dem Biotin-Bindungsort eines speziell entwickelten Streptavidin namens Strep-Tactin™.
Strep-tag™II bindet Strep-Tactin™ fast 100 Mal fester als Streptavidin, aber eluiert unter sanften, physiologischen Bedingungen. Eine schnelle Affinitätsreinigung in einem Arbeitsschritt führt zu aktiven Fusionsproteinen von höchster Reinheit. Physiologische Puffer, wie etwa PBS, können in Kombination mit einer Vielzahl von Reinigern, Chelatoren, Salz und Redox-Bedingungen verwendet werden. Die Konkurrenz-Elution mit Desthiobiotin, einem kostengünstigen, reversibel bindenden und stabilen Analogon von Biotin, ermöglicht einzigartige Reinigungsfaktoren. Das System ist sicher und einfach zu bedienen; die Regeneration der Säule und der Aktivitätsstatus werden durch eine Farbänderung an der Reinigungssäule visualisiert. Ein besonderer Vorteil von Strep-tag™II ist die neutrale Aminosäurezusammensetzung, die weder die Proteinfaltung oder -sekretion behindert noch die Proteinfunktion beeinträchtigt. Strep-tag™ ermöglicht die Aufreinigung rekombinanter Proteine von Roh-Lysaten mit einer Reinheit von über 99 % in einem einzigen Schritt. Die außergewöhnlichen Reinigungsfaktoren basieren auf i) der sehr niedrigen Tendenz von Strep-Tactin™, andere Proteine unspezifisch zu binden, ii) der hochspezifischen Interaktion zwischen Strep-tag™II und Strep-Tactin™ und iii) der spezifischen Konkurrenz-Elution mit winzigen Mengen an Desthiobiotin. Darüber hinaus ist die extreme Stabilität von Strep-Tactin™ die Basis robuster Affinitätsharze.
Der Strep-tag™ Proteinaufreinigungszyklus
ist ein Aufreinigungsverfahren unter physiologischen Bedingungen. Die Aufreinigung von Strep-tag™II-Fusionsproteinen kann unter fast physiologischen Bedingungen, z. B. im PBS-Puffer und zur Elution in PBS/2,5 mm Desthiobiotin-Puffer, durchgeführt werden:
Schritte 1 und 2:
Das Zelllysat wird der Säule hinzugefügt. Sobald das getaggte Protein spezifisch an Strep-Tactin™ gebunden ist, werden die Wirtsproteine schnell mit kleinen Mengen physiologischen Waschpuffers abgewaschen.
Schritt 3:
Anschließend wird das gebundene Strep-tag™II-Protein schonend eluiert, indem zusätzlich Waschpuffer hinzugefügt wird, der zusätzlich 2,5 mM Desthiobiotin enthält, das speziell für die Biotin-Bindungstasche konkurriert. Da die Pufferbedingungen während der Elution im Wesentlichen unverändert bleiben, werden potenziell unspezifisch bindende Proteine (ohne Strep-tag™) nicht eluiert und kontaminieren somit das betreffende Protein nicht. Neben der spezifischen Bindung von Strep-tag™ an Strep-Tactin™ist dies die zweite Spezifität, die den Schritt dieses Reinigungsverfahrens ermöglicht und eine extrem hohe Proteinreinheit ergibt.
Schritte 4 und 5:
Zur Regeneration der Säule wird reichlich gelber Azofarbstoff HABA (2-[4-Hydroxy-benzenazo] Benzoesäure) zugesetzt, um das Desthiobiotin aus der Bindungstasche zu verdrängen. Sobald HABA an die Bindungsstelle bindet, wechselt die Farbe zu rot und zeigt so auf komfortable Art und Weise den Regenerations- und Aktivitätsstatus der Säule an.
Schritt 6:
HABA kann durch Zugabe von Waschpuffer problemlos entfernt werden. Wenn die rote Farbe verschwunden ist, kann die Säule wieder verwendet werden. Strep-Tactin™ Harz kann 3 bis 5 Mal regeneriert und wiederverwendet werden, ohne dass die Leistung verloren geht.
Strep-Tactin™ Harze
Für die Strep-Tag™ Affinitätsreinigung. Mehrere Strep-Tactin™ Harzversionen sind erhältlich, die sich in ihren Eigenschaften und Anwendungen unterscheiden. Während Strep-Tactin™ Sepharose™ bevorzugt für die Schwerkraftfluss-Chromatographie verwendet wird, können Strep-Tactin™ Superflow™, die neue Strep-Tactin™ Superflow ™ High Capacity und Strep-Tactin™ MacroPrep™ auch für Niederdruck-, FPLC- und HPLC-Anwendungen und Strep-Tactin™ POROS™ (20 und 50) für FPLC- und HPLC-Chromatographie eingesetzt werden. Darüber hinaus eignet sich Superflow besonders für erhöhte Flussraten und für die Aufreinigung großer Proteinkomplexe.
H-PR-Kassetten (hochdruckfest) (Nr. 5)
Die H-PR-Kassetten sind hauptsächlich für die Verwendung mit Chromatographie-Workstations mit 10 bis 32 Anschlüssen (z. B. HPLC und Akta™) ausgelegt. Über gemeinsame Adapter lassen sie sich jedoch auch mit anderen Arbeitsstationen, Spritzen oder Peristaltikpumpen betreiben. Da die Säulengehäuse sehr druckfest (bis zu 20 bar) sind, können H-PR-Kassetten mit einer Durchflussbegrenzung verwendet werden. Die Kassetten können in Reihe geschaltet werden, um die Kapazität zu steigern.
Short Tag hat keinen Einfluss auf das Protein

• Schnelle Reinigung in einem Arbeitsschritt unter physiologischen Bedingungen
• Unübertroffene Reinheit und Bioaktivität