Invitrogen™ BLOCK-iT™ lentivirales Pol II miR RNAi-Expressionssystem mit EmGFP

Erweitert die Möglichkeiten von RNAi-Anwendungen über die anderer herkömmlicher retroviraler Systeme hinaus (Naldini, 1998). Das BLOCK-iT lentivirale Pol II miR RNAi-Expressionssystem mit EmGFP umfasst:
o Ein BLOCK-iT Pol II miR RNAi-Expressionsvektorkit für die Herstellung eines Expressionsklons, der ein doppelsträngiges Oligonukleotid enthält, das eine pre-miRNA-Sequenz zur Expression in Säugetierzellen kodiert. Der BLOCK-iT Pol II miR RNAi-Expressionsvektor (pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR) bietet eine schnelle und effiziente Möglichkeit zur Klonierung von Oligoduplexen, die eine gewünschte miRNA-Zielsequenz in einen Vektor mit einem Pol-II-Promotor (CMV) zur Verwendung in der RNAi-Analyse codieren. Der BLOCK-iT Pol II miR RNAi-Expressionsvektor wurde speziell für die Expression von miRNA-Sequenzen entwickelt und enthält spezifische miR flankierende Sequenzen, die eine ordnungsgemäße Verarbeitung von miRNA ermöglichen.
o Co-cistronische Expression eines Emerald GFP (EmGFP) Reporters im pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR Vektor führt zu einer sehr starken Korrelation der EmGFP-Expression mit der Knockdown-Aktivität Ihrer miRNA
o Der pDONR™221 Vektor zum Transfer der pre-miRNA-Expressionskassette in das lentivirale Expressionsplasmid mit Gateway™ Technologie. Die Gateway Technologie ist eine universelle Klonierungsmethode, die die seitenspezifischen Rekombinationseigenschaften der Bakteriophage Lambda (Landy, 1989) nutzt, um eine schnelle und hocheffiziente Methode zum Transfer Ihrer DNA-Sequenz von Interesse in mehrere Vektorsysteme zu bieten.
o Ein pLenti6/V5-DEST-Zielvektor, in den die pre-miRNA-Kassette aus dem Expressionsklon mithilfe der Gateway Technologie transferiert wird. Dieses Expressionsplasmid enthält Elemente, die das Verpacken des Konstrukts in Virionen und des Blasticidin-Resistenzmarkers zur Auswahl der stabil transduzierten Zelllinien ermöglichen.
o Gateway BP und LR Clonase™ II Enzymgemische, die den Transfer der pre-miRNA-Expressionskassette vom Expressionsvektor in den pLenti6/V5-DEST-Zielvektor erleichtern.
o Komponenten des ViraPower lentiviralen Systems zur Erzeugung eines replikationsunfähigen Lentivirus, das die miRNA von Interesse sowohl in teilenden als auch nicht teilenden Säugetierzellen stabil exprimiert. Die ViraPower lentivirale Technologie ermöglicht die hocheffiziente In-vitro- oder In-vivo-Abgabe eines Zielgens oder einer RNA an teilende und nicht teilende Säugetierzellen mit einem replikationsunfähigen Lentivirus. Basierend auf dem LentiKat™ System, das von Cell Genesys (Dull et al., 1998) entwickelt wurde, verfügt die ViraPower lentivirale Technologie über Merkmale, die ihre Biosicherheit verbessern und gleichzeitig eine hohe Expression in einem breiteren Spektrum von Zelltypen ermöglichen als herkömmliche retrovirale Systeme.

Klonierung, Gateway-Klonierung, lentivirale shRNA und miRNA, RNAi, RNAi, Epigenetik und Non-Coding-RNA-Forschung, virusbasierte RNAi