Invitrogen™ pENTR™/D-TOPO™ Klonierungskit mit One-Shot™ TOP10 chemisch kompetentem E. coli

• Stumpfendige PCR-Produkte können direktional mit mehr als 90%iger Effizienz kloniert werden, ohne Ligase, Verfahren nach der PCR oder Restriktionsenzyme.
• Rasches Hin- und Herschicken klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Zuverlässige Leistung
• Direktionaler Klonierungsvektor zur Eingabe in das Gateway-System
• Für Zugang zum Gateway System eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens durchführen und Produkt direkt an den mitgelieferten mit Topoisomerase geladenen pENTR/D-TOPO-Vektor anhängen. Danach 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren
• Die daraus resultierenden attL-enthaltenden Gateway Entry-Klone sind nun für eine effiziente Rekombination mit den gewünschten Gateway Zielvektoren bereit
• Der pENTR/D-TOPO-Vektor umfasst M13- und T7-Primer-Sequenzierungsstellen und attL-Rekombinationsstellen, die an der Einfügestelle des PCR-Produkts angebracht sind, wodurch Klone einfach sequenzgeprüft und in die Auswahl von attR-haltigen Gateway Zielvektoren umkombiniert werden können
• Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli
• Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit vierbasiger Sequenz im Vorwärtsprimer der PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität hin zur Topoisomerase-Ligationsreaktion
• Verhindert die Einschränkungen der Klonierung mittels Restriktion und erlaubt so Zugang zu praktisch jedem Expressionssystem in einer einstündigen, zu 99 % effizienten und reversiblen Gateway Rekombinationsreaktion
• Bewegen Sie dieselbe DNA-Sequenz zwischen verschiedenen Vektoren ohne Anwendung von Restriktionsenzymen, Ligase, Subklonierungsschritten, Screening von zahllosen Kolonien oder Resequenzierungen, um Zeit, Kosten und Aufwand zu sparen

Klonierung, Gateway-Klonierung