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Invitrogen™ SuperScript™ Erststrang-Synthese-System für die RT-PCR
Artikelnummer. 10684803
Marke: Invitrogen™ 11904018
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Beschreibung
Beinhaltet
50 μl Oligo(dT)12–18 (0,5 μg/μl); 250 μl Random-Hexamers (50 ng/μl); 1 ml 10X RT-Puffer; 500 μl 25 mM Magnesiumchlorid; 250 μl 0,1 M DTT; 250 μl 10 mM dNTP-Gemisch; 50 μl SuperScript II RT (50 E/μl); 100 μl RNaseOUT (40 E/μl); 50 μl E. coli RNase H (2 E/μl); 1,2 ml DEPC-behandelt; 15 μl Kontroll-RNA (50 ng/μl); 20 μl Kontrollprimer A (10 μM); 20 μl Kontrollprimer B (10 μM)
Das SuperScript Erststrang-Synthesesystem für RT-PCR kann mit nur 1 ng oder mit bis zu 5 μg Gesamt-RNA verwendet werden. Nach der Synthese kann die cDNA mit spezifischen Primern mittels PCR amplifiziert werden, ohne dass Zwischenschritte wie organische Extraktionen oder Ethanolfällungen notwendig sind. In Verbindung mit der PCR kann das System das Vorhandensein von seltenen Botschaften erkennen, um die Menge der spezifischen mRNA aus einer kleinen Anzahl von Zellen zu quantifizieren oder um spezifische cDNAs ohne Aufbau einer ganzen cDNA-Bibliothek zu klonen. Das System ist flexibel und erlaubt die Verwendung jedes PCR-Enzyms. Kombination mit AccuPrime™ Taq DNA-Polymerase oder Platinum Taq DNA-Polymerase für höher spezifische PCR oder mit AccuPrime Pfx DNA-Polymerase für Klonierungsanwendungen mit hoher Wiedergabetreue.
- SuperScript II RT Die Erststrang-cDNA-Synthesereaktion wird durch SuperScript II Reverse Transkriptase (RT) katalysiert. Dieses speziell zu diesem Zweck entwickelte Enzym reduziert die RNase-H-Aktivität, die mRNA während der Erststrang-Reaktion abbaut. Das Ergebnis ist eine bessere Synthese von cDNA in voller Länge und eine höhere Ausbeute an Erststrang-cDNA, als mit RNase H+ RTs möglich ist
- Da SuperScript II RT nicht signifikant von ribosomaler und Transfer-RNA gehemmt wird, kann es für die effektive Synthetisierung von Erststrang-cDNA aus Gesamt-RNA-Präparaten verwendet werden
- Das Enzym weist eine erhöhte thermische Stabilität auf und kann bei Temperaturen bis zu 50 °C verwendet werden.
Verwendung des SuperScript Erststrang-Synthesesystems für die RT-PCR Dieses System wurde für die Synthetisierung von Erststrang-cDNA aus unterschiedlichen Mengen Ausgangsmaterial optimiert. Die SuperScript II RT-Konzentration wurde gesenkt und RNaseOUT rekombinanter RNase-Inhibitor wurde als Teil dieser Optimierung hinzugefügt. Durch Modifizierung der Reaktionsbedingungen wurde die Empfindlichkeit des Systems weiter erhöht. Bei Verwendung dieses Kits wird Erststrang-cDNA synthetisiert, und zwar mittels Gesamt-RNA oder poly(A)+ selektierter RNA, an die Oligo(dT), Random-Primer oder ein genspezifischer Primer gebunden haben. Die PCR mit Primern, die für das zu untersuchende Gen spezifisch sind, wird in einem separaten Röhrchen durchgeführt.
PCR & Echtzeit-PCR, reverse Transkription
Bestellinformation
Versandbedingung: Nasseis
Spezifikation
Spezifikation
| Inhalt und Lagerung | • Oligo(dT)12-18, 50 μl (0,5 μg/μl) |
| Format | Kit |
| GC-Rich PCR Performance | Hoch |
| Reaktionsgeschwindigkeit | 50 min |
| Verfahren | Reverse Transkription |
| Optimale Reaktionstemperatur | 42 °C |
| Primer | Random-Primer, OligodT Primer |
| Menge | 50 rxns |
| Reverse Transkriptase | SuperScript II |
| Versandbedingung | Nasseis |
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Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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