Invitrogen™ SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix

Mit diesem System können RNA-Ziele von 100 bp bis > 12 kb nachgewiesen werden. Die Menge des Ausgangsmaterials kann im Bereich von 0,1 pg bis 5 μg der Gesamt-RNA liegen.

• Das Kit enthält SuperScript™ III/RNaseOUT™ Enzymgemisch, 2X Erststrang-Reagenzmischung und Annealing-Puffer.
• SuperScript™ III Reverse Transkriptase, im Enzym-Mix enthalten, ist eine Version von M-MLV RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet.
• Das Enzym kann für die Synthese von cDNA bei Temperaturen von 45 °C bis 55 °C verwendet werden und weist eine bessere Spezifität, höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produktvollständigkeit auf als andere reverse Transkriptasen.
• Da SuperScript™ III RT nicht signifikant von Ribosomal- und Transfer-RNA gehemmt wird, kann es für die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA verwendet werden.
• Der RNaseOUT™ Recombinant RNase Inhibitor ist im Enzyme Mix enthalten und schützt vor der Degradation der Ziel-RNA aufgrund von Ribonuklease-Kontamination.
• Der 2X Erststrang-Reaktionsmix umfasst 10 mM MgCl₂ und 1 mM von jedem dNTP in einer Puffer-Formulierung, die für die Erststrang-Synthese von cDNA optimiert wurde.
• Der Annealing-Puffer wird im ersten Template-Primer-Annealing-Schritt verwendet.
• Separate Röhrchen mit Oligo(dT)20 und Random-Hexamers werden ebenfalls bereitgestellt. Die cDNA-Synthese kann entweder mit Gesamt-RNA oder Poly(A)⁺-RNA, geprimt mit Oligo(dT), Random-Primern oder einem genspezifischen Primer durchgeführt werden.

• Optimale Reaktionstemperatur: 50 °C
• Ausreichend Material für 50 Reaktionen (je 20 μl)

PCR & Real-Time PCR, reverse Transkription