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Invitrogen™ SuperScript™ III System für Erststrangsynthese
Description
Includes
Oligo(dT)20 (50 μM), 50 μl; Random-Hexamers (50 ng/μl), 250 μl; 10X RT-Puffer, 1 ml; 0,1 M DTT, 250 μl; 25 mM Magnesiumchlorid, 500 μl; 10 mM dNTP-Gemisch, 250 μl; SuperScript III RT (200 E/μl), 50 μl; RNaseOUT (40 E/μl), 100 μl; E. coli RNase H (2 E/μl) 50 μl; DEPC-behandeltes Wasser, 1,2 ml; Gesamt-HeLa RNA (10 ng/μl), 20 μl; Sense-Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl; Antisense-Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl
Mit diesem System können RNA-Ziele von 100 bp bis > 12 kb nachgewiesen werden. Die Menge des Ausgangsmaterials kann im Bereich von 1 pg bis 5 μg der Gesamt-RNA liegen. SuperScript III Reverse Transkriptase ist eine Version von M-MLV RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym wird zur Synthetisierung von cDNA in einem Temperaturbereich von 42 °C bis 55 °C verwendet und bietet eine erhöhte Spezifität, eine höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkte voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da SuperScript III RT nicht signifikant von ribosomaler und Transfer-RNA gehemmt wird, kann sie für die Synthese von Erststrang-cDNA aus Gesamt-RNA-Präparaten verwendet werden.
- Verwendung des SuperScript III Erststrang-Systems: Die cDNA-Synthese erfolgt im ersten Schritt ausgehend von Gesamt-RNA oder Poly(A)+-RNA, an die Oligo(dT)-Nukleotide, Random-Primer oder genspezifische Primer gebunden haben.
- Im zweiten Schritt wird die PCR in einem separaten Röhrchen mit den für das relevante Gen spezifischen Primern durchgeführt.
- Für die PCR-Reaktion wird eine der folgenden DNA-Polymerasen empfohlen
- Platinum Taq DNA-Polymerase bietet automatische Heißstartbedingungen für erhöhte Spezifität von bis zu 4 kb
- Platinum Taq DNA-Polymerase High Fidelity bietet eine höhere Ausbeute und hohe Genauigkeit für Ziele von bis zu 15 kb
- Platinum Pfx DNA-Polymerase bietet maximale Genauigkeit für Ziele von bis zu 12 kb
- Optimale Reaktionstemperatur: 50 °C
- Ausreichend für 50 Reaktionen auf Basis eines Reaktionsvolumens von 20 μl
PCR & Real-Time PCR, reverse Transkription
Order Info
Versandbedingung: Trockeneis
Specifications
Specifications
| Inhalt und Lagerung | Das SuperScript™ III Erststrang-Synthesesystem für RT-PCR wird geliefert mit: • Oligo(dT)20 (50 μM), 50 μl • Zufällige Hexamere (50 ng/μl), 250 μl • 10x RT-Puffer, 1 ml • 0,1 M DTT, 250 μl • 25 mM Magnesiumchlorid, 500 μl • 10 mM dNTP-Mix, 250 μl • SuperScript III RT (200 E/μl), 50 μl • RNaseOUT (40 E/μl), 100 μl • E. coli RNase H (2 E/μl), 50 μl • DEPC-behandeltes Wasser, 1,2 ml • HeLa-Gesamt-RNA (10 ng/μl), 20 μl • Sense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl • Antisense Kontroll-Primer (10 μM), 25 μl Ausreichend für 50 Reaktionen, auf Basis eines Reaktionsvolumens von 20 μl. Bei -20°C lagern. |
| Format | Kit |
| GC-Rich PCR Performance | Hoch |
| Reaktionsgeschwindigkeit | 50 min |
| Verfahren | Reverse Transkription |
| Optimale Reaktionstemperatur | 50 °C |
| Menge | 50 rxns |
| Reverse Transkriptase | SuperScript III |
| Versandbedingung | Trockeneis |
| Zur Verwendung mit (Anwendung) | Real-Time PCR (qPCR), RT-PCR |
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Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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