Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli

Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Selektion rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten. In jedem Kit wird der pCR™4-TOPO TA-Vektor mit speziell gestalteten Sequenzierungs-Primerstellen verwendet, die aus jeder Reaktion mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz ergeben.
pCR4-TOPO TA Vektor: Optimiert zur Sequenzierung
Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen wurde vom pCR4-TOPO TA-Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stelle auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR4-TOPO TA-Vektor bietet Bindungsstellen für vier Standardsequenzierprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.
pCR4-TOPO TA-Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR4-TOPO TA-Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für die Positivselektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.
Vereinfachte TOPO-basierte Klonierung
Mit dem TOPO-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.
Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR4-TOPO TA-Vektor enthält 3'T-Überhänge für eine effiziente Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten mit 3'A-Überhängen.
Der Standard für die Klonierung
Seit über zehn Jahren verlassen sich Tausende Wissenschaftler bei der Klonierung auf das TOPO™ Verfahren. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.
TOPO TA Cloning Kits für die Sequenzierung – Kit-Optionen
Das TOPO TA Cloning Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielfalt kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile entsprechend Ihren Anforderungen bieten:

• Allgemeine Klonierung: TOP10 (Kat.-Nr. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K4580-01, K4580-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K4595-01, K4595-40)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K4530-20)

• Mehr Sequenzen: Sie erhalten mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz als bei der Verwendung von standardmäßigen Sequenzierprimern
• Schnell und einfach: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
• Effizient: Bis zu 95 % Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4000 Referenzen

• VEKTOR: pCR4-TOPO TA-Vektor: Optimierter Klonierungsvektor für verbesserte Sequenzierungsergebnisse
• Klonierungsmethode: TOPO TA Cloning: Topoisomerase I-basiert, 5-minütige Ligation von PCR-Produkten mit 3'-A-Überhängen (Taq-amplifiziert) zum Vektor
• Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Wählen Sie aus den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-resistenten oder schnell wachsenden kompetenten Zellen

Chromatin-Biologie, Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP), Klonierung, Methylierungsanalyse, PCR-Klonierung, RNAi, Epigenetik und Non-Coding RNA-Forschung, Sequenzierung von Bisulfit-Treated DNA