Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

Die TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Sequenzierung verwenden den pCR™4-TOPO™ TA Vektor mit speziell entwickelten Sequenzierungsprimerstellen, die mehr Insert- und weniger Vektorsequenz aus jeder Reaktion liefern. Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Auswahl rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment der Wahl enthalten.

• Mehr Sequenz — Ermöglicht mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz bei der Verwendung von Standard-Sequenzierungs-Primern
• Schnell und einfach — von der PCR zum Klon in nur 3 Schritten und 5 Minuten
• Effizient — bis zu 95 % Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt — zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4.000 Referenzen

TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Sequenzierung – Übersicht

• VEKTOR: pCR™4-TOPO™ TA-Vektor — optimierter Klonierungsvektor für verbesserte Sequenzierungsergebnisse
• KLONIERUNGSMETHODE: TOPO™ TA-Klonierung — Ligation von PCR-Produkten mit 3´A-Überhängen (Taq-amplifiziert) in den Vektor auf Basis von Topoisomerase I in 5 Minuten
• KOMPETENTE ZELLEN: Verschiedene Optionen — wählen Sie unter den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-resistenten oder schnell wachsenden kompetenten Zellen

pCR™4-TOPO™ TA Vektor — optimiert zur Sequenzierung
Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen vom pCR™4-TOPO™ TA Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stelle auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR™4-TOPO™ TA-Vektor bietet Bindungsstellen für 4 Standard-Sequenzierungsprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR™4-TOPO™ TA Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™4-TOPO™ TA Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für eine Positivselektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter für die In-vitro-Transkription sind ebenfalls vorhanden.

Vereinfachtes TOPO basiertes Klonen
Mit dem TOPO™ Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase hinzu, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in die bereitgestellten kompetenten E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren, was Zeit und Geld spart. Der pCR™4-TOPO™ TA Vektor in diesem Kit verfügt über 3´T-Überhänge für die effiziente Ligatur der Taq-amplifizierten PCR-Produkte mit 3´A-Überhängen.

Der Standard für die Klonierung
Seit über zehn Jahren verlassen sich Tausende Wissenschaftler bei der Klonierung auf das TOPO™ Verfahren. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz. Das TOPO™ TA Cloning™ Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielfalt kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile gemäß Ihrer Anforderungen bieten.