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Invitrogen™ Zero Blunt™ PCR-Klonierungskit, ohne kompetente Zellen

Artikelnummer. 10453792
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20 Reaktionen
40 Reaktionen
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Artikelnummer. 10453792 Leverandør Invitrogen™ Leverandørnr. K275020
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Nur f\u00FCr Forschungszwecke. Die Anwendung muss den Produktanweisungen entsprechen.

Beskrivelse

Indeholder

Zero Blunt™ PCR Cloning Kits enthalten: Linearisierter pCR™-Blunt-Vektor, ExpressLink™ T4-DNA-Ligase, 5x ExpressLink™ T4-DNA-Ligase-Puffer, Kontrollvorlage, dNTPs, steriles Wasser sowie M13-Vorwärts- und Rückwärts-Primer. Kompetente Zellkits enthalten chemisch kompetente One Shot™ E. coli, S.O.C.-Medium und ein supergewickeltes Kontrollplasmid.

Eine einfache Methode für die hocheffiziente (> 80 %) Klonierung von PCR-Produkten mit stumpfen Enden, die mit thermostabilen Proofreading-DNA-Polymerasen amplifiziert wurden

Das Zero Blunt™ PCR-Klonierungskit nutzt den vielseitig verwendbaren Klonierungsvektor pCR™-Blunt und ExpressLink™ T4-DNA-Ligase, um ein Ligationsprodukt in einem Ligationsschritt von 5 Minuten bei Raumtemperatur zu erzeugen.
Der pCR-Blunt Vektor bietet:

  • EcoRI-Schnittstellen zu beiden Seiten der Einfügestelle des PCR-Produkts zur Exzision von Inserts
  • T7-Promoter/Primer-Stelle zur In-vitro-RNA-Transkription und Sequenzierung
  • M13-Vorwärts- und Rückwärtsprimer-Stellen für Sequenzierung oder PCR-Screening
Funktionsweise der Zero Blunt PCR-Klonierung
Das Zero Blunt PCR Cloning Kit ermöglicht die Klonierung von PCR-Fragmenten – oder eines beliebigen DNA-Fragments – mit glatten Enden (blunt ends), mit einem schwachen Hintergrund nicht rekombinanter Klone. Der pCR-Blunt Vektor enthält das tödliche E. coliccdB-Gen, fusioniert mit dem C-Terminus von LacZα (Bernard et al., 1994). Die Ligation eines PCR-Produkts mit glattem Ende unterbricht die Expression der lacZα-ccdB-Genfusion, wodurch nur das Wachstum von positiven Rekombinanten nach der Transformation ermöglicht wird. Zellen, die nicht rekombinanten Vektor enthalten, werden getötet, wenn das Transformationsgemisch plattiert wird.
Kit-Konfigurationen
Das Zero Blunt PCR-Klonierungskit wird in einer Vielzahl von Konfigurationen angeboten: Mit One Shot™ TOPO10 chemisch kompetenten E. coli (K2700-20 und K2700-40) und ohne kompetente Zellen (K2750-20 und K2750-40) in Kitgrößen mit 20 und 40 Reaktionen.

  • Schnell und bequem: 5-minütige Ligation bei Raumtemperatur
  • Effizient: Gen ccdB für positive Selektion führt zu > 80 % Klonen mit korrektem Insert
  • Flexibel: Wahl von Kanamycin- oder Zeocin™-Resistenz für eine flexible Antibiotikaauswahl

Klonierung, PCR-Klonierung

Ordreinfo

Versandbedingung: Trockeneis

TRUSTED_SUSTAINABILITY

Tekniske data

Bakterien- oder Hefenstamm Nicht enthalten
Klonierungsmethode Blunt PCR
Inhalt und Lagerung Zero Blunt™ PCR-Klonierungskits enthalten linearisierten pCR™-Blunt-Vektor, ExpressLink™ T4-DNA-Ligase, 5 x ExpressLink™ T4-DNA-Ligase-Puffer, Kontroll-Template, dNTPs, steriles Wasser sowie M-13-Vorwärts- und Rückwärtsprimer.

Alle Komponenten sind bei –20 °C zu lagern. Alle Reagenzien bleiben bei ordnungsgemäßer Lagerung garantiert 6 Monate stabil.
Format Kit
Produktlinie TOPO, Zero Blunt
Produkttyp PCR-Klonierungskit
Promoter T7
Menge 20 Reaktionen
Vektor Blunt DNA-Klonierungsvektoren

Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.

Produkttitel
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