Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma Competitive Binding Assay Kit, goat

Dieses Kit enthält Ziege-Tb-Anti-GST-Antikörper; die anderen Kit-Komponenten sind identisch mit Kit A15145:

Der LanthaScreen™ TR-FRET PPAR-gamma kompetitive Bindungstest bietet eine empfindliche und robuste Methode für das Hochdurchsatz-Screening (HTS) von Liganden für den Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor gamma (PPAR-gamma). Das Kit verwendet einen Terbium-markierten Anti-GST-Antikörper, einen fluoreszierenden Kleinmolekül-Pan-PPAR-Liganden (Fluormone™ Pan-PPAR Green) und eine humane PPAR-gamma-Ligand-Bindungsdomäne (LBD), die mit Glutathion S-Transferase (GST) markiert ist, in einem homogenen fertigen Assay-Format, das nur noch angemischt werden muss.

Zur Assay-Durchführung:
Beim Ausführen des LanthaScreen™ TR-FRET PPAR-gamma kompetitiven Bindungstests wird Fluormone™ Pan-PPAR Green zu Liganden-Testverbindungen hinzugefügt, gefolgt von einer Mischung aus der PPAR-gamma-LBD und dem Terbium-markierten Anti-GST-Antikörper. Wenn Fluormon™ pan-PPAR Grün an PPAR-gamma gebunden ist, erfolgt eine Energieübertragung vom Terbium-markierten Antikörper zum Tracer, und es wird ein hohes TR-FRET-Verhältnis beobachtet. Die kompetitive Ligandenbindung an PPAR-gamma wird nachgewiesen mithilfe der Fähigkeit einer Testverbindung, die Markierungssubstanz zu verdrängen, was zu einem FRET-Verlust zwischen dem Antikörper und der Markierungssubstanz führt. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das 520 nm/495 nm-TR-FRET-Verhältnis berechnet und kann zur Bestimmung der IC50 anhand einer Dosisreaktionskurve der Verbindung verwendet werden (Abbildung 1). Diese Art des Bindungsassays ist analog zu Radioliganden-basierten Assays, mit dem Unterschied, dass nicht mit Radioaktivität umgegangen werden muss und ein homogenes, reines Zugabe-Format ermöglicht wird.