Invitrogen™ Premo™ Cellular Hydrogen Peroxide Sensor

Der roGFP-Orp1-Chimäre
Premo™ zelluläre Wasserstoffperoxid-Sensor kombiniert die Selektivität einer roGFP-Orp1-Chimäre mit der Transduktionseffizienz der BacMam 2.0-Technologie. Redox-empfindliches grün fluoreszierendes Protein (roGFP) erkennt Redox-Potenzial durch zwei in die β-Barrel Struktur des GFP-Proteins eingeführte Cysteine. Dilsulfid-Bildung zwischen den Cysteinen führt zu einer Protonierung des GFP und erhöht die 400 nm-Anregungsspektren auf Kosten der 488 nm-Anregungsspektren. Die Fluoreszenz bei den beiden verschiedenen Anregungswellenlängen kann mit derselben Emissionswellenlänge von 515 nm quantifiziert werden. Orp1 ist ein Wasserstoffperoxid-empfindliches Hefeprotein, das bei Reaktion mit Wasserstoffperoxid Disulfide bildet und die Fähigkeit hat, Signale durch Disulfid-Austausch zu anderen Redox-Proteinen zu leiten. Durch die Kombination der Wasserstoffperoxid-selektiven Eigenschaften von Orp1 und roGFP ist es möglich, Wasserstoffperoxid selektiv in Zellen zu quantifizieren.

BacMam-Technologie
Mit der integrierten BacMam-Technologie ist dieser Sensor bereit für den Einsatz – einfach Zellen zu Wachstumsmedien hinzufügen und über Nacht inkubieren. Die BacMam Technologie basiert auf der Verwendung eines Insektenzellvirus (Baculovirus), um Gene in Säugetierzellen effizient zu liefern und auszudrücken. Da Säugetierzellen die Replikation von Baculoviren nicht unterstützen, wird die Transduktion extrem gut toleriert und weist im Allgemeinen keine zytopathischen Effekte auf, selbst bei hohen Viruskonzentrationen.