Thermo Scientific™ Chemilumineszentes LightShift™ EMSA-Kit

Beschreibung

Das chemoilumineszierende Thermo Scientific™ LightShift EMSA-Kit ist ein außerordentlich stabiles und empfindliches System für Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) zur Identifizierung und Charakterisierung von Protein-DNA-bindenden Wechselwirkungen.

Das Kit enthält Reagenzien für die Einrichtung und Anpassung von DNA-bindenden Reaktionen, ein Kontrollset bestehend aus DNA- und Proteinextrakt zum Testen der Kit-Systeme, stabilisiertes Streptavidin-HRP-Konjugat zum Sondieren des mit Biotin markierten DNA-Ziels sowie ein besonders empfindliches chemoilumineszierendes Substratmodul für die Detektion. Das Prinzip der LightShift™ EMSA-Detektion entspricht dem Western Blot. Die mit Biotin endmarkierte Duplex-DNA wird mit einem nuklearen Extrakt oder einem gereinigten Faktor inkubiert und auf einem nativen Gel elektrophoresiert. Die DNA wird anschließend schnell (30 Minuten) auf eine positiv geladene Nylonmembran übertragen, UV-vernetzt, mit Streptavidin-HRP-Konjugat sondiert und mit dem Substrat inkubiert. Das Protokoll von der Markierung bis zu den Ergebnissen kann innerhalb eines Tages fertiggestellt werden. Für den Assay werden nur das gereinigte DNA-Ziel, das mit Biotin endmarkiert wurde, das zu testende Proteinextrakt, Nylonmembran sowie elementare Elektrophoreseinstrumente benötigt. DNA-Ziele können mit 5'- oder 3'-Biotinmarkierungen versehen oder nach der Synthese mit dem Thermo Scientific Biotin-Markierungskit für das DNA-3'-Ende (Art.-Nr. 89818) markiert werden. Nukleäre, zytosolische oder Gesamtzell-Proteinextrakte können durch verschiedene Methoden gewonnen werden, z. B. mit dem Thermo Scientific NE-PER Reagenzkit für die nukleäre und zytoplasmatische Extraktion (Art.-Nr. 78833).

Leistungsmerkmale:

• Das mitgelieferte EBNA-Kontrollsystem unterstützt neue Anwender bei der Entwicklung von funktionierenden Assays und beim Nachvollziehen der Methoden zur Bestätigung von Spezifitäten bei der Bindungsinteraktion
• Hervorragend geeignet für den Nachweis von Proteinen mit geringer Häufigkeit in nukleären Extrakten
• Höhere Empfindlichkeit als bei radioaktiven Methoden und Methoden mit Digoxigenin
• Kompatibel mit bereits bestehenden Bindungsbedingungen für weit verbreitete DNA-Protein-Interaktionen