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Beschreibung
Maxima Reverse Transkriptase (RT) wurde durch In-vitro-Evolution von M-MuLV RT entwickelt. Das Enzym besitzt RNA- und DNA-abhängige Polymerase-Aktivität sowie RNase H-Aktivität. Das genetisch veränderte Enzym zeichnet sich im Vergleich zur Wildtyp M-MuLV RT durch eine wesentlich höhere Thermostabilität, Robustheit und cDNA-Syntheseraten aus.
Die Maxima Reverse Transkriptase ermöglicht reproduzierbare cDNA-Synthesen über einen großen Bereich von Gesamt-RNA-Mengen hinweg (von 1 pg bis 5 μg) und bei höheren Temperaturen (50 bis 65 °C) , was dieses Enzym zum idealen Hilfsmittel für zweistufige RT-qPCR macht (siehe unterstützende Daten).
Aufgrund seiner hohen Thermostabilität behält das Maxima-Enzym die volle Aktivität während der gesamten Reverse Transkriptionsreaktion bei, erzeugt die höchsten Erträge an cDNA und kann selbst sehr lange RNA-Transkripte bis 20 kb synthetisieren (siehe unterstützende Daten). Die Reaktionstemperatur kann zur effizienten Transkription von RNA-Bereichen mit einer hohen Sekundärstruktur oder zur Verbesserung der Spezifizität von genspezifischen Primern bis auf 65 °C erhöht werden. Aufgrund der erhöhten Syntheserate kann die reverse Transkriptionsreaktion in 15 bis 30 Minuten ausgeführt werden.
Die Maxima Reverse Transkriptase ermöglicht reproduzierbare cDNA-Synthesen über einen großen Bereich von Gesamt-RNA-Mengen hinweg (von 1ápg bis 5 g) und bei höheren Temperaturen (50 bis 65 °C), was dieses Enzym zum idealen Hilfsmittel für zweistufige RT-qPCR macht (siehe unterstützende Daten).
Aufgrund seiner hohen Thermostabilität behält das Maxima-Enzym die volle Aktivität während der gesamten Reverse Transkriptionsreaktion bei, erzeugt die höchsten Erträge an cDNA und kann selbst sehr lange RNA-Transkripte bis 20 kb synthetisieren. Die Reaktionstemperatur kann zur effizienten Transkription von RNA-Bereichen mit einer hohen Sekundärstruktur oder zur Verbesserung der Spezifizität von genspezifischen Primern bis auf 65°C erhöht werden. Aufgrund der höheren Syntheserate kann die reverse Transkriptionsreaktion in 15 bis 30 Minuten ausgeführt werden.
Besonderheiten
• Hohe Ausbeuten von bis zu 20 kb von cDNA mit voller Länge
• Aktiv bis 65 °C
• Thermostabil – 90% aktiv nach 60-minütiger Inkubation bei 50°C
• Hochempfindlich – reproduzierbare cDNA-Synthese über einen großen Bereich von Gesamt-RNA (1 pg bis 5 µg)
• Effizient – vollständige cDNA-Synthese in 15 bis 30 Minuten
• Enthält modifizierte Nukleotide
Anwendungen
• Zweistufige RT-PCR
• Zweistufige RT-qPCR
• Erststrang-cDNA-Synthese
• Erstellung von Volllängen-cDNA-Bibliotheken
• DNA-Markierung
• Primer-Extension
Ebenfalls erhältlich: Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit für RT-qPCR
Spezifikation
Spezifikation
| Konzentration | 200 U/μl |
| Inhalt und Lagerung | Maxima Reverse Transkriptase (bereitgestellt als 2000 Einheiten in 200 U/μl-Konzentration) wird mit 5X RT-Puffer (250 mM Tris-HCl (pH 8,3 bei 25°C), 250 mM KCl, 15 mM MgCl2, 50 mM DTT) geliefert- Lagerung bei -20°C. |
| Format | Stand-alone Enzyme |
| GC-Rich PCR Performance | Hoch |
| Reaktionsgeschwindigkeit | 30 min |
| Verfahren | Reverse Transkription |
| Optimale Reaktionstemperatur | 50 °C bis 55 °C |
| Menge | 2000 Einheiten |
| Reverse Transkriptase | Maxima |
| Ribonuklease-H-Aktivität | Ja |
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Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
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