Molecular Probes™ MitoProbe™ JC-1 Assay-Kit

Beschreibung

Das MitoProbe™ JC-1 Assay-Kit ist ein schneller und zuverlässiger Assay zum Nachweis von Veränderungen in Mitochondrien durch Durchflusszytometrie.

Hier finden Sie eine Auswahlhilfe für alle Apoptose-Assays für die Durchflusszytometrie.

Selektive bis mitochondriale Veränderungen
Der membrangängige JC-1-Farbstoff wird häufig in Apoptose-Studien zur Überwachung der Mitochondrien-Gesundheit verwendet. Der Farbstoff JC-1 reichert sich potentialabhängig in Mitochondrien an, was durch einen Wechsel der Fluoreszenz von Grün (∼529 nm) auf Rot (∼590 nm) angezeigt wird. Eine mitochondriale Depolarisation wird folglich durch ein schwächer werdendes Rot/Grün-Verhältnis der Fluoreszenz sichtbar. Der potentialabhängige Farbwechsel erfolgt aufgrund der konzentrationsabhängigen Bildung rot fluoreszierender J-Aggregate.

Im Gegensatz zu anderen mitochondrialen Färbungen, die auf das Potential der Plasmamembran reagieren, ist das Verhältnis von grüner und roter Fluoreszenz bei JC-1 nur vom Membranpotential und nicht von anderen Faktoren wie Größe, Form und Dichte der Mitochondrien abhängig, die Ein-Komponenten-Fluoreszenzsignale beeinflussen können. Ein Nachweis über das Fluoreszenzverhältnis ermöglicht es Wissenschaftlern, anhand vergleichender Messungen des Membranpotentials zu bestimmen, welcher Prozentsatz der Mitochondrien in einer Population auf einen angewendeten Stimulus reagiert.

Indikator der frühen Apoptose
Ein charakteristisches Merkmal der frühen Phasen des programmierten Zelltodes ist die Störung der aktiven Mitochondrien. Dazu gehören Veränderungen des Membranpotentials und ein verändertes Redoxpotential der Mitochondrien. Änderungen des Membranpotentials erfolgen vermutlich aufgrund der Öffnung einer MPTP (mitochondrial permeability transition pore) genannten Pore, durch die Ionen und kleine Moleküle passieren können. Der daraus resultierende Ionenausgleich führt zur Entkopplung der Atmungskette und zur Abgabe von Cytochrom c ins Zytosol.

Einfaches, rationalisiertes Protokoll
Eine der größten Herausforderungen bei der Arbeit mit dual emittierenden Farbstoffen wie JC-1 ist die Kompensation. Das MitoProbe™ JC-1 Assay-Kit enthält den Entkoppler CCCP, der das mitochondriale Membranpotential abbaut und Kompensationskontrollen einrichtet, sodass ein korrekt kompensiertes Fluoreszenzverhältnis von Grün zu Rot entsteht. Das Protokoll der Färbung ist einfach und unkompliziert: Inkubieren Sie die Zellen mit dem Farbstoff JC-1, und analysieren Sie anschließend das Fluoreszenzsignal in den FITC- und PE-Kanälen eines 488 nm-Lasers.