Thermo Scientific™ Pierce™ Phosphoprotein Phosphate Estimation Assay Kit

Beschreibung

Das Thermo Scientific™ Phosphoprotein Phosphat-Bestimmungs-Kit ermöglicht die Klassifizierung und Identifizierung von Proteinen als phosphoryliert (Serin und Threonin) sowie die semi-quantitative Bestimmung des Phosphorylierungsgrads.

Das Assay-Kit zur Phosphoprotein Phosphat-Bestimmung dient der Unterstützung der Charakterisierung des Phosphorylierungsstatus und -umfangs gereinigter Proteinproben. Der Assay basiert auf der alkalischen Hydrolyse von Phosphaten an Seryl- oder Threonyl-Resten in Phosphoproteinen und der Quantifizierung des freigesetzten Phosphats mit Malachitgrün und Ammoniummolybdat. Der Assay lässt sich in 96-Well Mikrotiterplatten oder in Teströhrchen leicht durchführen und dauert ca. eine Stunde.

Der Assay kann verwendet werden, um zu ermitteln, ob ein gereinigtes Protein Phosphoserin (p-Ser) oder Phosphothreonin (p-Thr) enthält, und um den Grad dieser Art der Phosphorylierung zu bestimmen. Zur Quantifizierung wird die Test-Proteinprobe mit spezifischen Konzentrationen von Phosvitin, einem Phosphoprotein mit bekanntem Phosphorylierungsgrad, verglichen. Durch die alkalische Hydrolyse wird kein Phosphat von Phosphotyrosin (p-Tyr)-Resten in einer Peptidbindung freigesetzt. Daher zeigt ein negatives Ergebnis für eine unbekannte gereinigte Proteinaufarbeitung an, dass das Protein entweder (1) kein Phosphoprotein oder (2) ausschließlich an Tyrosinrückständen phosphoryliert ist. Im letztgenannten Fall ist eine Western Blot Analyse mit einem Anti-Phosphotyrosin-Antikörper erforderlich, um zwischen diesen beiden Möglichkeiten zu unterscheiden.

Leistungsmerkmale:

• Spezifisch –Misst nur Phosphoserin (p-Ser) und Phosphothreonin (p-Thr); misst kein Phosphotyrosin (p-Tyr)

• Praktisch – Reagenzgläser und 96-Well Mikrotiterplatten-Protokolle sind im Lieferumfang enthalten und erfordern Weniger als 90 Minuten für die Durchführung

• Semi-quantitativ –Berechnen der Molarität des Phosphats (P) pro Mol Protein anhand des mitgelieferten Phosvitin-Standards

• Anpassbar –Format ist anpassbar, um spezifische Assays für reine Phosphoproteine zu entwickeln, wenn vorher charakterisierte Standards verfügbar sind

Lieferumfang:

Ammoniummolybdatlösung, Malachitgrünlösung, Tris-gepufferte Salzlösung und Phosvitin-Positivkontrolle

Empfohlen für:

Identifizieren von Proteinen, die Phosphoserin- oder Phosphothreonin-Phosphorylierungen enthalten; Bestimmen des Anteils der pS- und pT-Phosphorylierung; Entwickeln spezifischer quantitativer Assays für gut charakterisierte Phosphoproteine von Interesse