Thermo Scientific™ Pierce™ Colorimetric Protease Assay Kit

Diese kolorimetrischen und fluoreszierenden Protease-Assay-Kits beinhalten zwei verschiedene Methoden zum Messen der Gesamt-Proteaseaktivität in biologischen Proben. Beide Kits können angewendet werden, um den Fortschritt von Protease-Aufreinigungsverfahren zu bestimmen oder die Protease-Kontamination in Proteinproben zu quantifizieren. Die Kits verwenden succinyliertes oder Fluoreszein-markiertes Casein als Protease-Substrat. Durch Proteolyse des Substrats entstehen Peptide, deren Aminogruppen oder deren geänderte Fluoreszenzeigenschaften die Detektion in den entsprechenden Kits ermöglichen. Die Protease-Aktivität wird durch Vergleich mit dem in jedem Kit enthaltenen Trypsin-Standard quantifiziert.

Besondere Merkmale:

• Kasein-Substrat – Messen Sie die Aktivität einer Protease, die Kasein in Peptidfragmente aufspaltet

• Trypsin-Standard – Quantifizieren Sie die Protease-Aktivität relativ zu Trypsin, einem allgemein anerkannten Referenzmittel

• Hoch empfindlich 100 x empfindlicher als Assays, die nicht modifizierte Kaseinformen verwenden

• Einfach und schnell – Die Protokolle für Reagenzgläser und Mikrotiterplatten werden in weniger als einer Stunde abgeschlossen

• Homogen – Nur Zufügungsschritte; keine Trennungs-, Transfer- oder Stoppschritte erforderlich

• Anpassbar – Passen Sie Zeit, Temperatur und pH-Wert einfach an, um die Empfindlichkeit für die zu untersuchenden Proteasen zu optimieren

Das kolorimetrische Protease-Assay-Kit (Bestellnr. 23263) verwendet für den Assay vollständig succinyliertes Casein als Substrat. Die Hydrolyse dieses Substrats bei Vorhandensein von Protease führt zur Freisetzung von Peptidfragmenten mit freien Amino-Endgruppen. Diese Peptide reagieren mit Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBSA), anschließend wird der Absorptionsanstieg gemessen, der sich aus der Bildung gelber TNB-Peptidaddukte ergibt.

• Substrat: succinyliertes Casein (nicht einzeln erhältlich)
• Assay-Basis: Detektion primärer Amine , die bei der Proteolyse entstehen
• Detektionsreagenz: Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBSA)
• Messung: Absorption bei 450 nm (Plattenlesegerät oder Spektrophotometer)

Das Protease-Fluoreszenzassay-Kit (Bestellnr. 23266) enthält Fluorescein-markiertes Casein als Substrat zur Bestimmung der Protease-Aktivität in einer Probe entweder durch Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET) mit einem Standard-Fluorometer oder durch Fluoreszenzpolarisation (FP) mit geeigneter Instrumentierung. FTC-Casein ist ein natives Casein, das durch einen großen molaren Überschuss Fluoreszeinisothiocyanat (FITC) markiert wurde. Die Fluoreszenzeigenschaften dieses „schwer“ markierten, intakten Proteinsubstrats ändern sich dramatisch durch die Digestion durch Proteasen, wodurch die Proteolyse messbar wird.

• Substrat: Fluoreszein-markiertes Casein (FITC-Casein); einzeln erhältlich unter Bestellnr. 23267
• Assay-Basis: Änderung der Fluoreszenzresonanz (FRET) oder der Fluoreszenzpolarisation (FP)
• Messung: Instrument mit Fluoreszeinerregungs- und -emissionsfiltern (485/538 nm)

Enthält:

Modifiziertes Casein, Trypsin-Standard und Tris-gepufferte Salzlösung (beide Kits); TNBSA Lösung (nur Bestellnr. 23263)

Empfohlen für:

Bestimmen Sie die funktionale Integrität und den Gesamtfortschritt der Proteasereinigung; Quantifizieren Sie die Protease-Kontamination in Proteinproben; Charakterisieren Sie die Aktivität ungewöhnlicher Proteasen im Vergleich zu Trypsin; Beurteilen Sie die Pufferbedingungen hinsichtlich ihrer Affekte auf Proteasefunktion und -aktivität