Thermo Scientific™ Pierce™ Trypsin/Lys-C Protease-Mix, MS-Gütegrad

Beschreibung

Proteincharakterisierung, -identifikation und -quantifizierung durch MS beginnt mit einem effizienten, reproduzierbaren Proteinverdau. Sequenzspezifische Proteasen werden verwendet, um Proteine in kleinere Fragmente oder Peptide aufzuspalten. Trypsin ist die Protease der Wahl für den Proteinverdau. Die separate oder sequenzielle Verdauung mit alternativen Proteasen kann jedoch die individuelle Proteinsequenzabdeckung verbessern oder einzigartige Peptidsequenzen für verschiedene MS-Anwendungen generieren.

Thermo Scientific™ Pierce™ Lys-C Protease, MS Grade ist eine hochreine native Endoproteinase, validiert für maximale Aktivität und Stabilität in proteomischen Anwendungen.

Merkmale der Lys-C Protease, MS-Grade:
• Verbesserte Verdauung – Verwendung in Kombination mit Trypsin zur Verringerung von versäumter tryptischer Spaltung
• Erhöhte Sequenz-Abdeckung – Verbesserte Proteincharakterisierung durch überlappende Peptide mit komplementärer Chromatographie, Ionisierung und Fragmentierungseigenschaften
• Vielseitigkeit – Effektive Enzymaktivität unter stark denaturierenden Bedingungen (z. B. 8 M Harnstoff)
• C-terminale Lysin-Spaltspezifität – Mindestens 90 % für eine komplexe Proteinprobe
• Stabilität – In lyophilisiertem Format bereitgestellt

Produktdetails
Diese aus Lysobacter enzymogenes isolierte Serinprotease ist für die Massenspektrometrie (MS) geeignet. Die hohe Aktivität und Spezifität von Lys-C-Protease für Lysin-Reste führt zu größeren Peptiden und einer geringeren Probenkomplexität als bei Trypsin (d. h. weniger Peptide). Im Gegensatz zu Trypsin kann Lys-C auch Lysine spalten, denen Proline folgen. Damit ist es ideal für einen sequenziellen Proteinverdau mit anschließendem Trypsin, um das Auftreten von verpassten Spaltungen zu verringern. Diese einzigartigen Eigenschaften von Lys-C-Protease sorgen für einen hocheffizienten Verdau, entweder bei alleiniger Verwendung oder im Verbund mit einem nachfolgenden tryptischem Verdau. Darüber hinaus weisen Lys-C prototypische Peptide in der Regel höhere Ladungszustände auf, wodurch es ein Enzym der Wahl für die Verwendung mit ETD-Fragmentierung ist.

Lys-C-Protease wird häufig in Workflows zur Phosphopeptid-Anreicherung verwendet, da sie Peptide mit primären Aminen sowohl am N- als auch am C-Terminus erzeugt, wodurch die Fragmente doppelt mit aminreaktiven isobarischen Tags markiert werden können. Dies führt zu einer verbesserten Peptidionisierung und zu verbesserten Quantifizierungsgrenzen, da mehr Fragment-Ionen während einer MS3-Aufzeichnung neu isoliert werden können. Dieses Enzym kann für Arbeitsabläufe mit In-Lösung- oder In-Gel-Verdau eingesetzt werden, um Peptide für einen Proteinnachweis per LC-MS/MS-Methode herzustellen. Dieses Lys-C-Enzym ist lyophilisiert verpackt (20 µg oder 100 µg Mengen).

Die Endoproteinase Lys-C hydrolysiert Proteine speziell an der Carboxylseite von Lysin. Die effiziente Proteinverdauung kann in 2 Stunden bei 37 °C abgeschlossen werden. Lys-C Protease bleibt auch unter stark denaturierenden Bedingungen aktiv, zum Beispiel bei 8 M-Harnstoff, 2 M-Guanidin-HCl, 1 % SDS, 2 % CHAPS und 40 % Acetonitril, und funktioniert gut bei einem pH-Wert zwischen 7 und 9 (maximale Aktivität bei pH 8). Dieses lyophilisierte Enzym hat eine Masse von 30 kDa und ist bei einer Lagerung bei -20 °C 1 Jahr lang stabil.

Anwendungen
• Verbesserte Sequenzabdeckung beim Proteinverdau
• De-novo-Sequenzierung
• Epigenetische Studien
• In-Gel- und In-Lösung-Verdauung von Proteinen