Thermo Scientific™ Pierce™ Trypsin/Lys-C Protease-Mix, MS-Gütegrad

Thermo Scientific™ Pierce™ Lys-C Protease, MS Grade ist eine hochreine native Endoproteinase, validiert für maximale Aktivität und Stabilität in proteomischen Anwendungen.

Merkmale der Lys-C Protease, MS-Grade:
• Verbesserte Verdauung – Verwendung in Kombination mit Trypsin zur Verringerung von versäumter tryptischer Spaltung
• Erhöhte Sequenz-Abdeckung – Verbesserte Proteincharakterisierung durch überlappende Peptide mit komplementärer Chromatographie, Ionisierung und Fragmentierungseigenschaften
• Vielseitigkeit – Effektive Enzymaktivität unter stark denaturierenden Bedingungen (z. B. 8 M Harnstoff)
• C-terminale Lysin-Spaltspezifität – Mindestens 90 % für eine komplexe Proteinprobe
• Stabilität – In lyophilisiertem Format bereitgestellt

Produktdetails
Diese aus Lysobacter enzymogenes isolierte Serinprotease ist für die Massenspektrometrie (MS) geeignet. Die hohe Aktivität und Spezifität von Lys-C-Protease für Lysin-Reste führt zu größeren Peptiden und einer geringeren Probenkomplexität als bei Trypsin (d. h. weniger Peptide). Im Gegensatz zu Trypsin kann Lys-C auch Lysine spalten, denen Proline folgen. Damit ist es ideal für einen sequenziellen Proteinverdau mit anschließendem Trypsin, um das Auftreten von verpassten Spaltungen zu verringern. Diese einzigartigen Eigenschaften von Lys-C-Protease sorgen für einen hocheffizienten Verdau, entweder bei alleiniger Verwendung oder im Verbund mit einem nachfolgenden tryptischem Verdau. Darüber hinaus weisen Lys-C prototypische Peptide in der Regel höhere Ladungszustände auf, wodurch es ein Enzym der Wahl für die Verwendung mit ETD-Fragmentierung ist.

Lys-C-Protease wird häufig in Workflows zur Phosphopeptid-Anreicherung verwendet, da sie Peptide mit primären Aminen sowohl am N- als auch am C-Terminus erzeugt, wodurch die Fragmente doppelt mit aminreaktiven isobarischen Tags markiert werden können. Dies führt zu einer verbesserten Peptidionisierung und zu verbesserten Quantifizierungsgrenzen, da mehr Fragment-Ionen während einer MS3-Aufzeichnung neu isoliert werden können. Dieses Enzym kann für Arbeitsabläufe mit In-Lösung- oder In-Gel-Verdau eingesetzt werden, um Peptide für einen Proteinnachweis per LC-MS/MS-Methode herzustellen. Dieses Lys-C-Enzym ist lyophilisiert verpackt (20 µg oder 100 µg Mengen).

Die Endoproteinase Lys-C hydrolysiert Proteine speziell an der Carboxylseite von Lysin. Die effiziente Proteinverdauung kann in 2 Stunden bei 37 °C abgeschlossen werden. Lys-C Protease bleibt auch unter stark denaturierenden Bedingungen aktiv, zum Beispiel bei 8 M-Harnstoff, 2 M-Guanidin-HCl, 1 % SDS, 2 % CHAPS und 40 % Acetonitril, und funktioniert gut bei einem pH-Wert zwischen 7 und 9 (maximale Aktivität bei pH 8). Dieses lyophilisierte Enzym hat eine Masse von 30 kDa und ist bei einer Lagerung bei -20 °C 1 Jahr lang stabil.

Anwendungen
• Verbesserte Sequenzabdeckung beim Proteinverdau
• De-novo-Sequenzierung
• Epigenetische Studien
• In-Gel- und In-Lösung-Verdauung von Proteinen